碱性蛋白胨水的应用

背景^[1-3]

碱性蛋白胨水是一种富集培养基，用于检测和培养弧菌物种，包括霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌和其他弧菌属。它通常在选择性富集和分离技术之前使用，例如使用TCBS（硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖）琼脂。碱性蛋白胨水的pH值范围为8.6至9.0，创造了有利于弧菌生长和繁殖的碱性环境。同时，这种碱性会抑制粪便大肠菌群和其他共生细菌的生长。

碱性蛋白胨水制法：将蛋白胨，NaCl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000蒸馏水中，校正PH8．4,分装试管，121℃高压灭菌15分钟后备用。

碱性蛋白胨水

碱性蛋白胨水工作原理

霍乱弧菌是引起霍乱疫情的成因。霍乱毒素（CT）是该菌的首要毒性因子。大多数从食品和环境中分离到的霍乱弧菌菌株不具有产毒能力，因此不是烈性的。多种生物化学特性和抗原性被作为该菌种的特征。摄入未经加热处理的海鲜引起的腹泻常常伴随拟态弧菌。分离弧菌应该做CT试验或检测CTX基因。经过富集后，筛选和验证该毒素可以用小鼠Y-1肾上腺细胞测定法和免疫测定法。

碱性蛋白胨水（ISO标准）最初作为非选择性气单孢菌属培养基。Cruickshank报导：如果提高pH值，该培养基可以有效地培养弧菌属。碱性蛋白胨水（ISO）利用了弧菌对高氯化钠浓度和碱性环境的耐受性。20%的氯化钠可以促进霍乱弧菌的生长。碱性条件能够抑制背景杂菌的生长。

应用^[4][5]

碱性蛋白胨水可以用于致病性弧菌增菌培养基和选择性鉴别培养基的研究

研究的目的和意义是设计和研制其它致病性弧菌的选择性鉴别培养基,以满足和储备日益严格的食品安全标准和不同检测条件的需求。

主要围绕以下几个方面开展了一些工作：1致病性弧菌增菌培养基及培养条件的改进研究本试验对弧菌增菌培养基(VEM)及培养条件进行改进研究,经过优化,获得一套适用于致病性弧菌增菌的VEM及培养条件。试验结果表明：以副溶血性弧菌为代表,用VEM在(36±1)℃+摇床120 r/min+2层牛皮纸封口条件下增菌培养,在相同时间内,其增菌菌液浓度是GB/T4789.7-2008中规定方法的碱性蛋白胨水(APW)增菌菌液浓度的1.8±0.6倍；对12中致病性弧菌进行的增菌培养试验结果表明,VEM能有效促进12种致病性弧菌的生长繁殖。VEM组成为：混合蛋白胨2%(胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：3)、酵母浸膏0.2%、NaCl3%、pH8.6。这为后续工作的顺利开展奠定了基础。

2创伤弧菌选择性鉴别培养基的研制本试验以创伤弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础,设计研制了创伤弧菌选择性鉴别培养基(VvDM)。试验中对VvDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。结果显示：VvDM对创伤弧菌具有较好的选择性和特异性；用VvDM在39℃培养16 h-24 h,创伤弧菌菌落为黄色；其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌落呈绿色或未形成有效的可见菌落；VvDM对创伤弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为(92.42±3.43)%；检出限为101 cfu/mL;因此,VvDM对海产品中创伤弧菌分离鉴别与检测是可行的,且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。

3拟态弧菌选择性鉴别培养基的研究本试验以拟态弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵抗力为基础,设计研制了拟态弧菌选择性鉴别培养基(VmDM)。试验中对VmDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。

结果显示：37℃培养24 h时,VmDM对拟态弧菌具有较好的选择性和特异性；拟态弧菌菌落为绿色或蓝绿色,其它弧菌菌落呈黄色或没有有效菌落形成；VmDM对拟态弧菌的出菌效率与嗜盐琼脂相比为(90.1±6.8)%；检出限为102cfu/mL。因此,VmDM对海产品中拟态弧菌分离鉴别与检测是可行的,且具有操作简便、经济、结果易于观察等优点。

4辛辛那提弧菌选择性鉴别培养基的研制本试验基于辛辛那提弧菌特有的综合酶系统及其代谢特点和对某些抑菌剂的抵抗力,设计开发出辛辛那提弧菌选择性鉴别培养基(VciDM).试验中对VciDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。

参考文献

[1]Methods for isolation and confirmation of Vibrio vulnificus from oysters and environmental sources:a review.Valerie J.Harwood;;Jagruti P.Gandhi;;Anita C.Wright.Journal of Microbiological Methods,2004

[2]Epidemiology and pathogenesis of Vibrio vulnificus.Mark S.Strom;;Rohinee N.Paranjpye.Microbes and Infection,2000

[3]Update on media for isolation of Enterobacteriaceae from foods.Enne de Boer.International Journal of Food Microbiology,1998

[4]Fluorogenic and chromogenic enzyme substrates in culture media and identification tests.M Manafi.International Journal of Food Microbiology,1996

[5]申科敏.致病性弧菌增菌培养基和选择性鉴别培养基的研究[D].浙江工商大学,2010.