念珠菌显色培养基的应用

背景^[1-3]

念珠菌显色培养基主要用于念珠菌的分离和鉴定，组分(g/L):蛋白胨:10.2;琼脂:15;色素:22;氯霉素:0.5;pH:6.1±0.2。

用于白色念珠菌分离和鉴定念珠菌显色培养基根据酶底物法，通过显色来区别不同念珠菌，25-28℃培养48小时后，白色念球菌显蓝绿色，热带念珠菌显蓝灰色或铁蓝色，光滑念珠菌显紫色，克柔假丝酵母显粉色，其它念珠菌显白色，细菌被抑制。

念珠菌显色培养

用法：称取本品9.6g（可按4.8g/100ml的比例扩大或缩小），加入200ml蒸馏水或纯化水中，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。将加热后的培养基水浴冷却至45-50℃，轻轻地摇匀，倾入无菌平皿（9cm的15ml/皿，7cm的10ml/皿），琼脂完全凝固后，在36℃±1℃的培养箱中倒置放置0.5-1小时，备用。

注意：制备好的培养基一定要保持表面干燥，可在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时。贮存制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干粉培养基应放置于阴暗干燥处，保存温度2-8℃，注意避光保存。

念珠菌显色培养基操作步骤

1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液；

2、取样品液涂布或划线接种于平板上；

3、25-28℃培养48h。白色念珠菌典型特征为蓝绿色，热带念珠菌显蓝灰色或铁蓝色，光滑念珠菌显紫色，克柔假丝酵母显粉色，其它念珠菌显白色,细菌被抑制。

4、对可疑白色念珠菌菌落可划线接种到PDA琼脂平板上，25-28℃培养24-48小时，挑取单菌落做镜检和生化试验。

应用^[4][5]

用于伊曲康唑联合Saps酶抑制剂利托那韦对白念珠菌的体外抗菌活性研究

探讨不同培养基（RPMI 1640培养基与YCB-BSA培养基）在白念珠菌体外药物敏感性中的差异性。

方法:1.收集初步筛选的可疑白念珠菌临床菌株32株,采用念珠菌显色培养基及分子生物学方法进一步鉴定;将鉴定后的菌株分别采用美国临床实验室标准化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）推荐的M27-A4微量肉汤稀释法和酵母菌碳基-牛血清白蛋白培养基（YCB-BSA）进行伊曲康唑体外药物敏感性试验,分别判读、记录各自MIC50值,对其分组、进行统计学分析,如数值变量符合正态分布,则以均值±标准差表示,否则以非参数检验进行分析。以P<0.05为具有统计学意义。

2. 选取鉴定的白念珠菌菌株27株,以YCB-BSA为生长培养基,使用棋盘法进行RIT联合ITR体外药敏试验,实验结果参考CLSI M27-A4进行MIC50值判读。将部分中ITR单药的MIC记录为ITR-MIC1,与RIT联合后的MIC记录为ITR-MIC2,对其进行统计分析,对比以YCB-BSA为培养基时联合用药前后MIC50值的差异,如数值变量符合正态分布,则以±S表示,否则进行非参数检验分析,以P<0.05为具有统计学意义。使用公式ITR-MIC1/ITR-MIC2计算ITR与RIT联合后的增效倍数,探究伊曲康唑联合Saps酶抑制剂利托那韦对白念珠菌体外抗菌活性的影响。

3. 结果:1.经念珠菌显色培养及分子生物学鉴定,32株可疑临床菌株中有27株为白念珠菌;其中敏感菌株占52%（14株）、剂量依赖性敏感菌株占7%（2株）、耐药菌株占41%（11株）。

2. 不同培养基所得MIC50值的统计学分析结果:各组数值变量均不符合正态分布,以中位数±四分位距（M±Q）表示,RPMI 1640组为0.1250±15.9375,YCB-BSA组为0.0625±0.0937,Z值为-2.196,P<0.05,差异具有统计学意义;耐药组中,RPMI 1640组为16.0000±8.0000,YCB-BSA组为0.0625±0.0625,Z值为-4.098,P<0.05,差异具有统计学意义;敏感组中RPMI 1640组为0.0625±0.0312,YCB-BSA组为0.0625±0.0468,Z值为1.085,P>0.05,差异不具有统计学意义;剂量依赖性敏感组中RPMI 1640组与YCB-BSA组未计算出M±Q,计算Z值为-1.549,P>0.05,差异不具有统计学意义。

3.在以YCB-BSA为生长培养基的药敏试验中,对ITR单药MIC50值与ITR联合RIT的MIC50值进行统计分析:ITR单药组为0.0625±0.0937,联合用药组为0.0313±0.0000,Z值为-4.750,P值,<0.05,差异具有统计学意义。

参考文献

[1]Antifungal Activity of ZnO Nanoparticles and Nystatin and Downregulation of SAP1-3 Genes Expression in Fluconazole-Resistant Candida albicans Isolates from Vulvovaginal Candidiasis.[J].Hosseini Seyededeh Sedigheh,Joshaghani Hamidreza,Shokohi Tahereh,Ahmadi Alireza,Mehrbakhsh Zahra.Infection and drug resistance.2020

[2]Potential role of Candida albicans secreted aspartic protease 9 in serum induced-hyphal formation and interaction with oral epithelial cells[J].Haiping Yang,Peter Chiu Shun Tsang,Edmond Ho Nang Pow,Otto Lok Tao Lam,Paul Wai-Kei Tsang.Microbial Pathogenesis.2020(C)

[3]Relationship between Sap prevalence and biofilm formation among resistant clinical isolates of Candida albicans.[J].Kadry Ashraf A,El-Ganiny Amira M,El-Baz Ahmed M.African health sciences.2018(4)

[4]The antifungal pipeline:a reality check.[J].Perfect John R.Nature reviews.Drug discovery.2017(9)

[5]宋悦.伊曲康唑联合Saps酶抑制剂利托那韦对白念珠菌的体外抗菌活性研究[D].山西医科大学,2021.