小肠结肠炎耶尔森氏菌的致病性

背景^[1][2][3]

小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocolitica）是少数几种能在冷藏温度下（0－4℃）生长繁殖的肠道致病菌之一。流行病学研究表明，食品在冰箱中储藏过长的时间，能增加耶尔森氏菌感染的危险。小肠结肠炎耶尔森氏菌病（耶氏菌病）是20 世纪80 年代才受到重视的一种新的肠道传染病，不少地区耶氏菌引起的胃肠炎和严重腹泻，比痢疾还多。

1981年我国才发现此病，通过全国性调查和研究，发现其在我国的分布非常广泛。20 世纪80 年代中期我国发生过两次大的流行，造成500 多人感染，主要由血清型O：3 和O：9 引起。鉴于小肠结肠炎耶尔森氏菌的危害性，很多国家都已将该菌列为食品的常规检测项目。

我国也颁布了检测该菌的国家标准和检验检疫行业标准。小肠结肠炎耶尔森氏菌是近年来受到重视的食源性病原菌，目前已发现58 个血清型，研究认为仅少数几个血清型有致病性。虽然由该菌感染引起的腹泻可以自愈，但感染引起的一些慢性迁延型疾病较严重。

特点^[1]

小肠结肠炎耶尔森氏菌属肠杆菌科，最适生长温度为22～29℃，在0℃也能生长。有34种O抗原，19种H抗原和1种K抗原，由抗原组成可分成许多菌群。从病人分离出的菌型大多数为O₃型，少数为O₅、O₈、O₉和混合型。可引起急性胃肠炎型食物中毒，其发病情况与沙门氏菌和志贺氏菌引起的食物中毒相似。

在自然界中分布较广，动物带菌率也较高，乳、肉、水产品(牡蛎、贝类)、糕点等食品及马、猪、鹿、家禽、狗、鼠等动物的排泄物中皆能检出。人群对该菌普遍易感，但以儿童为最。对氯霉素、庆大霉素、链霉素、卡那霉素、硝基呋喃、多粘菌素B和四环素敏感。

致病性^[4][5]

小肠结肠炎耶尔森氏菌是一个很重要的人类和动物肠道致病菌，病人最常见的临床症状有腹泻，胃肠炎，肠系膜淋巴结炎，更为严重者可引起败血症，伴随肝脓肿。其它器官组织也会产生病变，如活动性关节炎和结节性红斑。小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica，Y. e)，简称耶氏菌，属于肠杆菌科耶尔森氏菌属，最早1933年发现于美国纽约州，由Frederiksen在1964年命名的，小肠结肠炎耶尔森氏菌在自然界分布很广，动物是该菌的重要宿主，几乎所有的家畜都曾发现该 菌的自然感染，其中猪携带量最高，其次为犬、鸡、牛和羊等。

小肠结肠炎耶尔森氏菌是一类人畜共患病病原菌，也是重要的食源性致病菌之一，很多国家都已将该菌列为进出口食的常规检测项目，在过去的二十年间，欧、美等国家发生了多起的由该菌引起的食源性中 毒事件；在上世纪80年代中期我国证实有两次大的暴发流行，造成五百多人感染，其原因均为食物污染小肠结肠炎耶尔森氏菌引起的。

该菌具有嗜冷性，能在冷藏条件下生长与 繁殖，而且在一定条件下会产生耐热性肠毒素，是冷藏食品的一大威胁，尤其是贮藏于冰箱 中的肉制品、奶制品。人感染后，其临床表现多样，其中以胃肠炎(或小肠结肠炎)最为常见，还能引起呼吸道、心脑血管系统、骨骼、结缔组织和全身疾病，甚至引起急性阑尾炎、败血症。

许多动物都有可能受到小肠结肠炎耶尔森氏菌的感染，几乎所有家养动物都属于自然感染，其中一部分动物，如猪、牛、猫和狗等，被认为是小肠菌的健康带菌者。小肠结肠炎耶尔森氏菌典型的宿主动物是猪（带菌率最高），有50%的被侵染率。牛的被侵染率也很大，约为7.9%~24.6%。啮齿类动物的携菌几率大概在5.2%~10%之间，目前已检测出的本身携带小肠结肠炎耶尔森氏菌的啮齿动物有30多种。

检测方法 ^[5][6]

小肠结肠炎耶尔森氏菌是重要的人畜共患病微生物，能通过食物传播。该菌能够引起多种动物以及人的小肠结肠炎耶尔森氏菌病。正因如此很多国家规定，对于进出口的食品该菌是必检的常规项目。常规的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法操作步骤复杂，并且费时，一般要 3~7 天，例如2008年颁布的新国标GB/T4789.8-2008是目前主流的检测手段，不能达到快速检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的要求。

传统检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法包括增菌培养、理化鉴定、血清分析等一系列复杂过程，且这种方法适用于设备齐全的检测实验室中所用，存在检测周期长，实验准备材料时间长，不能满足食品安全检验市场大批量检验需求。

随着技术的发展多种分子生物学方法也被应用到小肠结肠炎耶尔森氏菌快速检测中，比如通过检测相关基因来定性分析，或是胶体金免疫法，此类方法检测成本高，设备要求昂贵，并且对检测人员的操作有一定的技术要求，在食品原材料检验市场推广尚有较大难度所以建立一种快速、有效的检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法是迫切需要的。

有研究提供一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法，包括如下步骤：

步骤一，制备探针分子：根据小肠结肠炎耶尔森氏菌的基因组结构和保守序列，选取小肠结肠炎耶尔森氏菌的毒力基因ail作为检测目标片段，根据GenBank： KT209996.1公开的小肠结肠炎耶尔森氏菌ail基因序列，设计探针分子，所述探针分子序列为5’- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA-3’，所述探针分子的5’端采用报告荧光基团进行标记，即探针分子结构为：报告荧光基团- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA；

步骤二，将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子：报告荧光基团- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA混合，然后加入待测样品，检测荧光。

检测方法成本低廉，其是将靶核酸分子特异性结合探针分子吸附在聚苯乙烯纳米球表面，淬灭探针分子的荧光，然后，当探针分子与待测样品中的DNA分子混合，杂交形成双链时，探针分子从聚苯乙烯纳米球表面脱离，荧光淬灭效应消失，通过检测荧光信号实现对待测样品的检测，根据荧 光的强度变化还可确定待测样品中靶核酸分子的含量。

该方法实现起来十分简单，不需要使用昂贵的PCR仪器以及昂贵的ELISA检测试剂，仅需简单的荧光检测设备即可实现结果的检测和分析，检测时间短、灵敏度高，可以广泛用于食品安全检测，特别是基层食品卫生监督部门的食品安全检测。

主要参考资料

[1] 卫生学大辞典

[2] 许文炯, 丁洁, 陈晓蔚, 等. 小肠结肠炎耶尔森氏菌主要毒力基因分析[J]. 中國人獸共患病學報, 2007, 23(7): 675-677.

[3] 张昕, 张惠媛, 汪琦, 等. 小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测[J]. 检验检疫科学, 2008, 18(6): 23-26.

[4] 廖远泉, 王后伟. 小肠结肠炎耶尔森氏菌研究的一些进展[J]. 安徽预防医学杂志, 2000, 6(3): 240-240. 

[5] CN201710059097.7 一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法及其应用

[6] CN201810456811.0 一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的显色培养基及其应用