HELF 人胚肺成纤维细胞的应用

背景^[1-3]

HELF人胚肺成纤维细胞是一种人类胚胎肺成纤维细胞系列的细胞株。这种细胞系来自于人类胚胎肺组织，被广泛用于研究肺部疾病、细胞生物学和分子生物学等领域。HFL1细胞是一种成纤维细胞，主要功能包括产生胶原蛋白和其他细胞外基质成分，参与组织修复和炎症反应等生物学过程。

人胚胎肺成纤维细胞（Human Embryonic Lung Fibroblasts，简称HELF）是来源于人类胚胎肺组织的一种细胞类型。这些细胞在胚胎发育的早期阶段存在，主要功能包括产生胶原蛋白和其他细胞外基质成分，参与组织结构的维持和修复。

HELF人胚肺成纤维细胞是一种成纤维细胞，类似于HFL1细胞，它们在研究肺部疾病、细胞生物学和分子生物学等领域具有重要作用。研究人员可以使用HELF细胞来探究肺部疾病的发病机制，测试药物的疗效，研究细胞信号传导通路，以及研究细胞生长、增殖和分化等生物学过程。

HELF人胚肺成纤维细胞的研究有助于深入了解肺部疾病的发展机制，为相关疾病的治疗和预防提供科学依据。同时，这些细胞也在医学研究和药物开发领域被广泛应用。

HELF人胚肺成纤维细胞

HELF人胚肺成纤维细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

HELF人胚肺成纤维细胞可以用于砷对HELF细胞β-catenin、Axin、C-myc基因mRNA表达的影响

为了解砷暴露对肺癌发病率影响,以及砷暴露对HELF人胚肺成纤维细胞β-catenin.Axin、C-myc mRNA表达的影响,为进一步探明砷致肺部病变的机制提供参考资料。

方法：通过文献查阅法对以往有关砷暴露致肺癌的相关文献进行meta分析,以发现砷暴露对肺癌发病率的影响,从大体上得出砷暴露对肺癌的影响。通过实验的方法探讨砷暴露对HELF人胚肺成纤维细胞形态学、细胞生长、氧化应激的改变；使用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡的改变；使用反转录PCR检测WNT信号通路核心分子的基因表达的改变。

结果：(1)Meta分析发现砷暴露增加肺癌的发病风险(OR=2.19,95%CI=1.60.3.01):(2)砷暴露可以导致细胞形态学的改变,使HELF人胚肺成纤维细胞变形,细胞核变大；(3)砷暴露的剂量及时间的增加可导致细胞的抑制率增加；(4)与对照组相比,各浓度各时间亚砷酸钠染毒HELF细胞G2+M期的比例均升高；HELF细胞G2+M期的比例在染毒24、48h时均与亚砷酸钠染毒浓度呈正相关(24h：r=0.959,P<0.05；48h：r=0.768,P<0.05)。(5)HELF人胚肺成纤维细胞凋亡比例在染毒24、48、72h时均与亚砷酸钠染毒浓度均呈正相关(24h:r=0.927,P<0.05；48h:r=0.921,P<0.05,72h：r=0.989,P<0.05)。(6)染毒24、48、72h时,与对照组相比,砷暴露组培养液内的超氧化物岐化酶的活力均下降(P<0.05)；各浓度亚砷酸钠染毒细GSH-PX浓度下降(P<0.05)。HELF人胚肺成纤维细胞GSH-PX浓度在染毒24、48、72h时均与亚砷酸钠染毒浓度均呈负相关(24h:r=-0.989,P<0.05；48h：r=-0.990,P<0.05,72h：r=-0.970,P<0.05)。(7)与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒24、48、72h后HELF人胚肺成纤维细胞内β-catenin mRNA表达均降低(P<0.05);细胞内Axin mRNA表达均增高(P<0.05)；细胞内C-myc mRNA表达均下降(P<0.05)。

参考文献

[1]β‐catenin involvement in arsenite‐induced VEGF expression in neuroblastoma SH‐SY5Y cells[J].Piyajit Watcharasit;;Sumitra Suntararuks;;Daranee Visitnonthachai;;Apinya Thiantanawat;;Jutamaad Satayavivad.Environ.Toxicol,2014(6)

[2]Low-level arsenic exposure is associated with bladder cancer risk and cigarette smoking:a case–control study among men in Tunisia[J].Molka Feki-Tounsi;;Pablo Olmedo;;Fernando Gil;;Rim Khlifi;;Mohamed-Nabil Mhiri;;Ahmed Rebai;;Amel Hamza-Chaffai.Environmental Science and Pollution Research,2013(6)

[3]Arsenicosis history and research progress in Mainland China[J].Guifan Sun;;Yuanyuan Xu;;Quanmei Zheng;;Shuhua Xi.Kaohsiung Journal of Medical Sciences,2011(9)

[4]Exposure to airborne metals and particulate matter and risk for youth adjudicated for criminal activity[J].Erin N.Haynes;;Aimin Chen;;Patrick Ryan;;Paul Succop;;John Wright;;Kim N.Dietrich.Environmental Research,2011(8)

[5]陈保林.砷对HELF细胞β-catenin、Axin、C-myc基因mRNA表达的影响[D].新疆医科大学,2014.