人抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测样本中人抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)的含量。

原理：用抗人PCNA单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的PCNA与单抗结合，加入生物素化的抗人PCNA，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，PCNA浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PCNA浓度。

人抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒

检测程序：

1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

3.每孔中加入抗体工作液10 0ul。将反应板充分混匀后置37℃6 0分钟。

4.洗板：同前。

5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃3 0分钟。

6.洗板：同前。

7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。

8.每孔加入100ul终止液混匀。

9.30分钟内用酶标仪在45 0 nm处测吸光值。

结果计算与判断

1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 mU/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应PCNA含量即可。

应用^[4][5]

用于薯蓣皂苷元对Ad-TSHR-289诱导Graves病模型小鼠甲状腺细胞增殖及免疫功能的影响研究

通过动物体内实验来研究Dio对GD的治疗作用。

1. 评价Dio对Ad-TSHR-289诱导GD模型小鼠甲状腺肿大的治疗作用；从抑制细胞增殖的角度,初步探讨其分子生物机制。

2. 研究Dio对Ad-TSHR-289诱导GD模型小鼠免疫功能的影响。

方法：1.动物模型构建及药物干预具体分组如下：正常对照组,正常小鼠高剂量Dio干预组（100mg·kg-1·day-1）,阴性病毒对照组,GD模型组,GD模型低剂量Dio治疗组,GD模型高剂量Dio治疗组。

应用重组腺病毒Ad-TSHR-289,肌肉注射免疫雌性BALB/c小鼠,每隔3周注射一次,共3次,制备GD动物模型。成模后的小鼠分别给予高、低剂量的Dio治疗。Dio治疗12和24天后,分两批次处死小鼠,留取血清、甲状腺、脾脏标本。

3. Dio治疗过程中毒副作用的初步评估处死称量前体重,采用全自动生化分析仪检测血清中的谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、肌酐（Cr）。

4. Dio对GD模型小鼠甲状腺肿大治疗作用评价采用放射免疫法和电化学发光法测TT4和TRAb变化；Image-Pro Plus6.0图像分析软件测量甲状腺大小；H&E染色及电子显微镜观察甲状腺组织及超微结构变化。

4.Dio抑制甲状腺细胞增殖相关机制研究采用BrdU掺入实验检测小鼠甲状腺组织中增殖细胞的变化；免疫组化检测Dio干预后小鼠甲状腺组织中IGF-1、NF-κB、cyclin D1、PCNA蛋白水平的变化；Real-time PCR检测Dio干预后小鼠甲状腺组织中IGF-1、cyclin D1、PCNAmRNA水平的变化。

参考文献

[1]Activation of nuclear factor-κB contributes to growth and aggressiveness of papillary thyroid carcinoma[J].Jung-Soo Pyo,Guhyun Kang,Dong Hoon Kim,Seoung Wan Chae,Chanheun Park,Kyungeun Kim,Sung-Im Do,Hyun Joo Lee,Joo Heon Kim,Jin Hee Sohn.Pathology-Research and Practice.2013(4)

[2]A 2011 Survey of Clinical Practice Patterns in the Management of Graves?Disease[J].Henry B.Burch,Kenneth D.Burman,David S.Cooper.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.2012(12)

[3]Anti-tumour and immunomodulating activities of diosgenin,a naturally occurring steroidal saponin[J].Zhongmei He,Yudan Tian,Xiantao Zhang,Bai Bing,Lianxue Zhang,Huaisheng Wang,Wenjie Zhao.Natural Product Research.2012(23)

[4]Beneficial role of diosgenin on oxidative stress in aorta of streptozotocin induced diabetic rats[J].Leelavinothan Pari,Pandurangan Monisha,Abdul Mohamed Jalaludeen.European Journal of Pharmacology.2012(1-3)

[5]蔡鹄.薯蓣皂苷元对Ad-TSHR-289诱导Graves病模型小鼠甲状腺细胞增殖及免疫功能的影响[D].山东大学,2013.