人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）检测样本中人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)的含量。

原理：已知PLAP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将PLAP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用产生颜色。颜色的深浅和样品中PLAP的浓度呈比例关系。

人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)ELISA试剂盒

操作步骤:

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于脑脊液和血清肿瘤标志物β-hCG、αFP、PLAP及s-kit（CD117）对中枢神经系统生殖细胞肿瘤的诊断价值研究

以组织病理和脑脊液细胞学为基础,评估脑脊液和血清中肿瘤标志物—β-hCG、αFP及PLAP、s-kit对颅内生殖细胞肿瘤的诊断价值。

方法：1.将32例经组织病理／脑脊液细胞学确诊的颅内GCTs患者（既往组）及在多科综合诊断平台基础上,26例患者（研究组）的诊断情况进行比较：包括患者基本情况、确诊情况、延迟诊断情况、肿瘤标志物染色和脑脊液细胞学情况、CSF和血清中肿瘤标志物测定水平。

2. 结合两组可用同步CSF和血清肿瘤标志物数据,观察β-hCG、αFP水平的分布差别；评价当前不同的诊断标准的优劣；以朗格汉斯细胞组织细胞增生症组（langerhans cell histiocytosis.LCH,12例）和其余颅内肿瘤组（5例）为对照,用受试者工作曲线（receiver operating characteristic,ROC）计算p-hCG及αFP在CSF和血清中相应的新诊断切点,并评估新标准的诊断价值；评价男性不完全性性早熟／隐匿性低促性腺激素性高雄激素血症患者中肿瘤标志物对于早期诊断的提示意义。

3. 用ELISA法测定研究组、LCH组、其余颅内肿瘤组和海马硬化组（5例）的CSF和血清中PLAP和s-kit水平,用ROC曲线分别计算两者合理诊断切点；并评估新标准的诊断价值。

4.使用SPSS11.5作为数据统计的工具；正态分布数值资料、非正态分布数值资料（经对数变换后）使用独立样本T检验,或单因素方差分析（One-Way ANOVA）比较统计学差异；分类资料行wilcoxon signed-ranks test或卡方检验；ROC曲线计算诊断切点；P<0.05认为有统计学差异。

参考文献

[1]The blood–brain barrier in health and disease[J].Richard Daneman.Ann Neurol..2012(5)

[2]Bifocal Intracranial Germinoma:A Retrospective Analysis of Treatment Outcomes in 20 Patients and Review of the Literature[J].David C.Weksberg,Yuta Shibamoto,Arnold C.Paulino.International Journal of Radiation Oncology,Biology,Physics.2012(4)

[3]Diagnostic sensitivity of serum and lumbar CSF bHCG in newly diagnosed CNS germinoma[J].Jeffrey Allen,Jeena Chacko,Bernadine Donahue,Girish Dhall,Cynthia Kretschmar,Regina Jakacki,Emi Holmes,Ian Pollack.Pediatr.Blood Cancer.2012(7)

[4]Validation of the human chorionic gonadotropin immunoassay in cerebrospinal fluid for the diagnostic work-up of neurohypophyseal germinomas[J].Víctor González-Sánchez,Oscar Moreno-Pérez,Pedro Sánchez Pellicer,Ruth Sánchez-Ortiga,Rocío Alfayate Guerra,Montserrat Mauri Dot,Antonio Miguel PicóAlfonso.Annals of Clinical Biochemistry.2011(5)

[5]胡明明.脑脊液和血清肿瘤标志物β-hCG、αFP、PLAP及s-kit（CD117）对中枢神经系统生殖细胞肿瘤的诊断价值[D].北京协和医学院,2013.