氯霉素酶联免疫试剂盒的应用

背景^[1-3]

氯霉素酶联免疫试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被氯霉素抗体，样品中的游离氯霉素与酶标记的氯霉素竞争结合酶标板微孔中固相化的氯霉素特异性抗体，通过洗涤步骤洗掉未结合的酶标记氯霉素，再通过酶的专一性显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中氯霉素含量。

具体的根据竞争性原理，如果样品中的游离氯霉素量少，则酶标记的氯霉素结合的多显色深，反之则显色浅。氯霉素检测时设置标准曲线，通过标准曲线测定样品中氯霉素的含量。

氯霉素酶联免疫试剂盒组分

氯霉素是一种常用的广谱抗菌素，通过抑制细菌蛋白质合成而发挥抑菌作用，对大多数革兰氏阴性和阳性细菌有效，而对革兰氏阴性菌作用较强，特别是对伤寒、副伤寒杆菌作用最强。但使用氯霉素存在严重的毒副作用，主要是抑制骨髓造血功能，引起粒细胞及血小板减少症以及再生障碍性贫血。再生障碍性贫血虽少见，但难逆转，常可致死。

氯霉素类抗生素可作用于细菌核糖核蛋白体的50S亚基，而阻挠蛋白质的合成，属抑菌性广谱抗生素。

细菌细胞的70S核糖体是合成蛋白质的主要细胞成分，它包括50S和30S两个亚基。氯霉素通过可逆地与50S亚基结合，阻断转肽酰酶的作用，干扰带有氨基酸的胺基酰-tRNA终端与50S亚基结合，从而使新肽链的形成受阻，抑制蛋白质合成。

由于氯霉素还可与人体线粒体的70S结合，因而也可抑制人体线粒体的蛋白合成，对人体产生毒性。因为氯霉素对70S核糖体的结合是可逆的，故被认为是抑菌性抗生素，但在高药物浓度时对某些细菌亦可产生杀菌作用，对流感杆菌甚至在较低浓度时即可产生杀菌作用。

应用^[4][5]

用于生物素放大酶联免疫方法检测氯霉素残留研究

对兽药氯霉素的传统酶联免疫分析方法进行了改进,将生物素亲和素放大系统引入酶联免疫检测方法中,建立了氯霉素生物素放大酶联免疫（BA-ELISA）检测方法。

对于间接BA-ELISA方法,经过反应条件的优化,方法灵敏度（IC50）为0.46±0.05μg/L,最低检测限（IC15）为0.05±0.01μg/L,板间变异及板内变异系数低于19.7%。

对于直接BA-ELISA方法,首先制备出了高效的生物素化抗体,经反应条件的优化,方法灵敏度IC50为0.37±0.04μg/L,最低检测限（IC15）为0.03±0.006μg/L,板间变异及板内变异系数低于14.0%。对两种生物素方法从检测限、灵敏度、变异系数及检测所用时间等多方面进行比较,最终选择直接BA-ELISA方法用于实际样品的检测。

进一步将所建立的直接BA-ELISA方法应用于动物源性食品,包括牛奶、猪肉和鱼肉样品中氯霉素残留的快速检测,对样品的前处理方法进行详细的考察和筛选,优化出基质干扰程度小、处理过程简单快速的方法。

分别对氯霉素在三种实际样品中的添加回收率进行测定,回收率在86%-110%之间,可满足残留检测方法对检测灵敏度的要求,也可满足快速筛选的需要。

采用液相色谱法对建立的氯霉素生物素放大酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高,线性相关系数R2值达0.9706,证明了所建立的直接BA-ELISA方法的准确度及可靠性。

参考文献

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[3]Homogeneous time-resolved fluoroimmunoassay for the measurement of midregional proadrenomedullin in plasma on the fully automated system B.R.A.H.M.S KRYPTOR?[J].Pascaline Caruhel,Christian Mazier,Jan Kunde,Nils G.Morgenthaler,Bruno Darbouret.Clinical Biochemistry.2009(7)

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[5]王莉.生物素放大酶联免疫方法检测氯霉素残留[D].天津科技大学,2010.