褪黑素的制备方法和含量测定

背景及概述^[1]

褪黑素，又名褪黑激素，其化学名为5-甲氧基-N-乙酰色胺(N-(2-(5-methoxy-1H-indol-3-yl)ethyl)acetamide)，是一种吲哚类化合物。褪黑素的生理和药理活性十分广泛，主要作用是调节昼夜节律、睡眠一觉醒生物节律相位转换、改善睡眠，也具有抗氧化、清除自由基、抗炎症、抗凋亡、降低体温、抑制肿瘤生长、抑制生殖系统功能、提高记忆、治疗痴呆症、延缓衰老、抗焦虑、改善吗啡戒断症状、改善骨质疏松、抗癫痈等多种作用。在眼部，褪黑素参与调节视网膜功能昼夜节律性变化、视网膜信息传递等。褪黑素还与毛发生长有密切关系，可影响动物皮毛的季节性换毛。初步研究还表明，褪黑素可以改善肠易激综合征病人的症状，因而，其在医药、食品等行业的应用前景受到广泛关注。

制备^[1]

(1)向反应容器中加入500mL乙腈，100g邻苯二甲酰亚胺和281.8g碳酸钾，室温搅拌30min，然后向其中加入115.19g的1,3-二氯丙烷和152.82g碘化钠；加料毕，逐渐升温至58～60℃并在此温度范围搅拌反应5.5h，取样监测原料邻苯二甲酰亚胺反应完全；

然后称取132.68g的乙酰乙酸乙酯，缓慢滴加至上述反应液中，加料毕，继续反应7h；将反应液降至室温，过滤，母液浓缩至干得化合物Ⅰ纯品207.5g，收率为96.2％。

(2)向反应容器中加入100mL水和121g的对甲氧基苯胺，降温至0～5℃；向其中缓慢加入298.53g的浓盐酸(36wt％)，加料毕，搅拌30min；然后于0～5℃向上述反应液中缓慢滴加174.57g的亚硝酸钠水溶液(质量分数为43％)，继续搅拌30min，得到对甲氧基苯基重氮盐；

将207.5g化合物Ⅰ溶于540g甲醇中，于0～5℃条件下将溶解于甲醇中的化合物Ⅰ缓慢加入到上述对甲氧基苯基重氮盐的反应液中；加料毕，使反应液逐渐升至室温并加热至45～50℃，反应7h；取样监测原料反应完全，降至室温，加入500g二氯甲烷萃取，分出有机层，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干得化合物Ⅱ纯品248.5g，收率为96.9％。

(3)向反应容器中加入200g水和40g氢氧化钠，待其溶清于室温条件下，加入248.5g的化合物Ⅱ，升温至88～90℃，反应5～6h；然后将反应液降至10～20℃，缓慢加入192.4g的浓盐酸(36wt％)，加料毕，升温至107～110℃，反应1～2h；然后将反应液降至室温，过滤，滤饼用水洗涤至中性，于55℃烘干得化合物Ⅲ纯品119.3g，收率为99.0％。

(4)向反应容器中加入105g二氯甲烷和119.3g化合物Ⅲ，搅拌溶清后缓慢加入73.8g乙酰氯；于25～30℃反应1～2h；反应结束后过滤，滤饼用二氯甲烷洗涤，于55℃烘干得褪黑素纯品143.2g，收率为98.3％。

对制备得到的褪黑素结构进行表征，具体如下：

¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ(ppm),8.1(brs,1H),7.3(d,1H),7.05(brs,2H),6.9(d,1H),5.6(brs,1H),3.9(s,3H),3.6(m,2H),2.95(t,2H),1.95(s,3H)。

含量测定^[2]

褪黑素片（片剂，标示服用量为每次1片，高效液相色谱色谱法测定结果本品每片含褪黑素8.5mg）.

取1片量内容物，研磨均匀，放入100mL具塞烧瓶中，用乙醚稀释至刻度，烧瓶塞紧，在磁力搅拌机上搅拌15min后，过滤，静置片刻，取2mL乙醚萃取液在25mL容量瓶中，40℃水浴蒸发至干。加入2mL1g/L的Fe(Ⅲ)‑邻菲罗啉试剂，加入5mL的pH4.6醋酸钠‑醋酸缓冲溶液，70℃水浴加热10min，冷却至室温，观察有红色浑浊产生，由此可判断样品中含有褪黑素。用蒸馏水稀释至刻度，在510nm波长下测定其吸光度，根据标准曲线，测得其中褪黑素含量为8.36mg。

参考文献

[1][中国发明]CN201911242727.X褪黑素的制备方法

[2][中国发明]CN201310207854.2一种褪黑素的测定方法