大鼠3,4-二羟基苯基二醇(DHPG)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠3,4-二羟基苯基二醇(DHPG)ELISA试剂盒应用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）可以检测大鼠3,4-二羟基苯基二醇(DHPG)的体外浓度。已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

操作步骤

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于厚朴配伍远志对大鼠体内代谢物的影响机制研究

采用代谢组学技术,基于有效改善胃肠动力障碍的剂量,将SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、远志水提物、醇提物1.75g/kg组,厚朴水提物、醇提物3.50g/kg组,厚朴与远志配伍水提物、醇提物5.25g/kg组（依据体表面积换算）,连续灌胃给药3d,收集各组大鼠末次给药后24h内的尿液及粪便。

结果:（1）厚朴与远志不同提取物2:1配比对小鼠胃肠动力的影响:结果显示,与空白组比较,5%吐温-80对小鼠胃肠动力无显著影响（P>0.05）,吗丁啉组显著促进小鼠胃排空与小肠推进（P<0.05,P<0.01）;与相应对照组比,远志水提物、醇提物1.25、2.50、5.00g/kg均可极显著地降低小鼠胃排空率（P<0.01）。

（2）厚朴与远志不同提取物2:1配比对大鼠尿液与粪便代谢物的影响:研究结果表明,水提物组尿液代谢物中分别鉴别出L-岩藻糖等20种特征代谢标志物。。

水提物粪便代谢物中鉴别出苯乙醛等15个特征代谢标志物。其中远志组5,6:8,9-Diepoxyergost-22烯3,7β二醇、5b-胆甾烷-3α,7a,12a,24,25-戊醇、3a,7a,12a-三羟基-5b-胆甾-24-烯、3a,7α-二羟基前列腺酸显著升高（P<0.05,P<0.01）;远志组苯乙醛、3,4-二羟基苯基乙二醇、3-甲氧基-4-羟基苯乙醛、3a,6a,7b-三羟基-5b-胆烷酸、十八烷酸的含量呈现不同程度的下降,配伍厚朴可显著回调上述代谢物的水平（P<0.05,P<0.01）。

参考文献

[1]Effects of Magnolia officinalis compatibility with Polygala tenuifolia on mitochondrial metabolism in rats’liver based on bio-thermodynamics[J].Juan Du,Jianxia Wen,Mingquan Wu,Yanling Zhao,Lihua Huang,Yang Wang,Qian Xie,Xiao Ma,Jian Wang.Journal of Thermal Analysis and Calorimetry.2017(3)

[2]Comparative metabolomics analysis for the compatibility and incompatibility of kansui and licorice with different ratios by UHPLC-QTOF/MS and multivariate data analysis[J].Juan Shen,Zong-Jin Pu,Jun Kai,An Kang,Yu-Ping Tang,Li-Li Shang,Gui-Sheng Zhou,Zhen-Hua Zhu,Er-Xin Shang,Shao-Ping Li,Yu-Jie Cao,Wei-Wei Tao,Shu-Lan Su,Li Zhang,Huiping Zhou,Da-Wei Qian,Jin-Ao Duan.Journal of Chromatography B.2017

[3]Validation of biomarkers in cardiotoxicity induced by Periplocin on neonatal rat cardiomyocytes using UPLC-Q-TOF/MS combined with a support vector machine[J].Aizhu Li,Xuejun Guo,Jiabin Xie,Xinyu Liu,Zhenzhu Zhang,Yubo Li,Yanjun Zhang.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2016

[4]Mass spectrometry‐based metabolomics:applications to biomarker and metabolic pathway research[J].Aihua Zhang,Hui Sun,Guangli Yan,Ping Wang,Xijun Wang.Biomed.Chromatogr..2016(1)

[5]马荣.厚朴配伍远志对大鼠体内代谢物的影响机制研究[D].成都中医药大学,2019.