大鼠一氧化氮(NO)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

大鼠一氧化氮(NO)ELISA KIT采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。一氧化氮是近年来发现的一种由血管内皮细胞以及部分神经细胞释放的血管活性物质。

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于糖肾康改善糖尿病肾病早期肾血流动力学异常及一氧化氮水平的研究

观察以健脾补肾、活血化瘀为法组方的中成药糖肾康，对糖尿病肾病早期肾血流动力学异常的改善作用，以及与一氧化氮的关系，探讨该药的作用机理，寻求糖尿病肾病早期防治的理论依据。

方法将100例糖尿病肾病患者随机分为两组，其中观察组60例，予以糖肾康治疗，对照组40例，予以糖适平治疗，两组均以1个月为一疗程。结果临床研究表明，糖肾康对糖尿病肾病，尤其是早期，有良好的治疗作用，可有效地改善临床症状，降低血糖、血脂，改善血液流变学异常，减少尿微量白蛋白和改善肾功能。

实验研究表明，糖肾康可明显降低糖尿病肾病模型大鼠增高的一氧化氮水平，并有效降低血糖、糖基化血红蛋白、血脂及尿微量白蛋白。

结论糖尿病肾病早期一氧化氮产生增加可能是肾血流动力学异常的重要因素，糖肾康可以通过降低一氧化氮水平而达到改善肾血流动力学的目的，从而对糖尿病肾病的早期防治有重要作用。

参考文献

[1]Mechanism of Increased Sensitivity to Cerebral is Chemia Flowing Carotid Artery Occlusion in Stroke-Prone Spontaneously Hypertensive rats.Masahiro S,Mitsuru K,Masaki S,et al.Importance of Genetic Factors Stroke.1981

[2]Test of the roles of two diffusible substances in long-term potentiation:evidence for nitric oxide as a possible early retrograde messenger.O’Dell T J,Robert D,Hawkins E,et al.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.1991

[3]Nitric Oxide Synthase Isozymes:Characterization,Purification,Molecular Cloning,and Functions[J].Ulrich Forstermann,Ellen I.Closs,Jennifer S.Pollock,Masaki Nakane,Petra Schwarz,Ingo Gath,Hartmut Kleinert.Hypertension.1994(6,P)

[4]Endothelium-Derived Relaxing Factor From Pulmonary Artery and Vein Possesses Pharmacologic and Chemical Properties Identical to Those of Nitric Oxide Radical[J].Louis J.Ignarro,Russell E.Byrns,Georgette M.Buga,Keith S.Wood.Circulation Research.1987(6)

[5]韩文霞.糖肾康改善糖尿病肾病早期肾血流动力学异常及一氧化氮水平的研究[D].山东中医药大学,2002.