标准兔血清(碳吸附过滤)的应用

背景^[1-3]

标准兔血清(碳吸附过滤)是用无菌家兔血液制备的碳吸附过滤型血清制品，可用于细胞的体外培养。

血清是血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。

其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

碳吸附型血清是一款低水平类固醇类的血清产品，通过碳吸附可降低血清中许多激素及生长因子的浓度，如雌二醇、皮质醇、皮质酮、B类维生素、T3、T4、前列腺素等，该血清适用于上述一些分子可能干扰实验结果的实验中对于那些需要这些分子的细胞培养，可能降低细胞生长性能。活性炭能够结合脂溶性分子，因此能够用来除去激素类物质。

应用^[4][5]

用于兔原始生殖细胞（PGCs）体外培养条件优化的研究

以14-18d胎兔为试验对象,体外分离、培养、扩增PGCs,观察PGCs的形态变化及集落形成的过程,用AKP染色及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,并探索饲养层种类、血清含量、细胞因子等因素对兔PGCs分离培养的影响,这也为下一步的建系工作做出了铺垫。

1. 本试验选取昆明白近交系小鼠13-15d胎龄胎鼠和日本大耳白兔18-21d胎龄胎兔,体外分离培养其胚胎成纤维细胞,对不同代细胞冻存不同时间后进行复苏并计算复苏率、制作生长曲线。

得出以下结论:（1）小鼠、兔的P3代胚胎成纤维细胞生长活性优良,结构形态、生理功能稳定,且传至P3代的细胞被纯化,更适合作为备用细胞使用;

（2）经短时间（30d、60d）冻存的P1、P3代MEF和REF复苏后其生长性能并没有大幅度下降,而P3代相较P1来说细胞更纯,因此可选用P3代MEF、REF短时间冻存,以便于后续试验的需要。

2. 本试验选用的是日本大耳白兔14-18d胎龄胎兔,无菌剥离生殖嵴,体外分离培养PGCs,并采用酶组织化学检测碱性磷酸酶活性、RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达等方法对其进行鉴定,检测结果呈阳性。将PGCs分别接种于MEF、REF制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度的最适宜培养条件;当培养液中血清含量不同以及是否添加细胞因子LIF时,对于PGC培养的影响,并选出的方案。

得出以下结论:（1）在14-18d的兔胚胎生殖嵴中均可得到PGCs;

（3）兔原始生殖细胞接种于用兔胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上生长状况、集落形态情况,分化速度较慢,此为饲养层的最适条件。

（3）优化了培养方案,用此方案可得到更多的集落,且集落维持未分化状态的时间更长,培养液成分:高糖DMEM+1%NEAA+1%双抗+2mmol/L L-谷氨酰胺+0.1mmol/Lβ-巯基乙醇+20ng/mL LIF+15%FBS。

参考文献

[1]Primordial Germ Cells:Current Knowledge and Perspectives[J].Aleksandar Nikolic,Vladislav Volarevic,Lyle Armstrong,Majlinda Lako,Miodrag Stojkovic,Irma Virant-Klun.Stem Cells International.2015

[2]In vitro culture and characterization of putative porcine embryonic germ cells derived from domestic breeds and Yucatan mini pig embryos at Days 20–24 of gestation[J].Stoyan G.Petkov,Hendrik Marks,Tino Klein,Rodrigo S.Garcia,Yu Gao,Henk Stunnenberg,Poul Hyttel.Stem Cell Research.2011(3)

[3]An Autogeneic Feeder Cell System That Efficiently Supports Growth of Undifferentiated Human Embryonic Stem Cells[J].PetraStojkovic,MajlindaLako,RebeccaStewart,StefanPrzyborski,LyleArmstrong,JeromeEvans,AlisonMurdoch,TomStrachan,MiodragStojkovic.STEM CELLS.2009(3)

[4]Derivation of Human Embryonic Germ Cells:An Alternative Source of Pluripotent Stem Cells[J].LeeTurnpenny,SarahBrickwood,Cosma M.Spalluto,KarenPiper,Iain T.Cameron,David I.Wilson,Neil A.Hanley.STEM CELLS.2008(5)

[5]王亚丹.兔原始生殖细胞（PGCs）体外培养条件优化的研究[D].河南农业大学,2017.