ANTI-CD20抗体的应用

背景^[1-3]

ANTI-CD20抗体是一类可以特异性结合CD20的单克隆抗体，主要用于检测CD20的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中CD20水平。用纯化的CD20抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CD20，再与HRP标记的CD20抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CD20呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中CD20浓度。

CD20表达于除浆细胞（分泌免疫球蛋白的B细胞）外的发育分化各阶段的B细胞的表面，通过调节跨膜钙离子流动直接对B细胞起作用，在B细胞增殖和分化中起重要的调节作用。CD20抗原是一种B细胞分化抗原，仅位于前B细胞和成熟B细胞，它在95%以上的B细胞性淋巴瘤中表达，而在造血干细胞、血浆细胞和其他正常组织中不表达。

CD20可能通CD（白细胞分化抗原）是指血细胞在分化、成熟过程中的细胞表面标记.CD20表达于除浆细胞（分泌免疫球蛋白的B细胞）外的发育分化各阶段的B细胞的表面,过调节跨膜钙离子流动直接对B细胞起作用,在B细胞增殖和分化中起重要的调节作用。

应用^[4][5]

用于新型重组抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体结构与功能研究

以原研药利妥昔单抗为对照，应用液相色谱-电喷雾离子化四极杆飞行时间质谱(LC-ESI-Q-TOF)技术，通过交替高低能量碰撞扫描，源内诱导解离及二级质谱的方法从质量肽图水平到完整蛋白亚单位水平，再到游离寡糖水平逐级研究CMAB304的结构，特别是其寡聚糖结构特征，与原研药对比分析后对CMAB304糖链结构进行确证解析。

研究发现，CMAB304与原研药具有相同的蛋白质一级结构，即氨基酸序列，同时在两种抗体的重链Fc段上又存在明显不同的糖形相对比例，即CMAB304在G0和G1特别是G0等非岩藻糖基化糖形方面比原研药含量明显升高。这一结果提示CMAB304应具有更高的体外ADCC活性。

体外活性研究结果表明，CMAB304具有与FcγRIIIa（Fc gamma receptor IIIa，CD16a）更强的结合活力和更强的ADCC效应，但补体依赖的细胞毒效应（CDC）在两者之间并没有显示出明显的区别。这一发现进一步证实CMAB304具有与原研药不同的糖形相对比例水平。

采用流式竞争法检测I期临床研究中受试者的血液样本，获取其血清药物浓度，使用WinNonLin（Pharsight Corp，6.1版）药动学分析应用软件进行房室模型拟合，探索其药动学和体内代谢规律。

参考文献

[1]An afucosylated anti-CD20 monoclonal antibody with greater antibody-dependent cellular cytotoxicity and B-cell depletion and lower complement-dependent cytotoxicity than rituximab[J].John R.Gasdaska,Steven Sherwood,Jeffrey T.Regan,Lynn F.Dickey.Molecular Immunology.2012(3)

[2]Safety and efficacy of ocrelizumab in patients with rheumatoid arthritis and an inadequate response to at least one tumor necrosis factor inhibitor:Results of a forty‐eight–week randomized,double‐blind,placebo‐controlled,parallel‐group phase III trial[J].P.P.Tak,P.J.Mease,M.C.Genovese,J.Kremer,B.Haraoui,Y.Tanaka,C.O.Bingham,A.Ashrafzadeh,H.Travers,S.Safa‐Leathers,S.Kumar,W.Dummer.Arthritis&Rheumatism.2012(2)

[3]Ofatumumab demonstrates activity against rituximab‐sensitive and‐resistant cell lines,lymphoma xenografts and primary tumour cells from patients with B‐cell lymphoma[J].Matthew J.Barth,Francisco J.Hernandez‐Ilizaliturri,CoryMavis,Ping‐ChiaoTsai,John F.Gibbs,GeorgeDeeb,Myron S.Czuczman.British Journal of Haematology.2012(4)

[4]CD20 as a Target for Therapeutic Type I and II Monoclonal Antibodies[J].Stephen A.Beers,Claude H.T.Chan,Ruth R.French,Mark S.Cragg,Martin J.Glennie.Seminars in Hematology.2010(2)

[5]李先平.新型重组抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体结构与功能研究[D].第二军医大学,2013.