小鼠Β内酰胺酶抑制剂(BLI)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠Β内酰胺酶抑制剂(BLI)ELISA试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中BLI水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入BLI、生物素化的抗人BLI抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的BLI呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

β-内酰胺酶抑制剂（β-Lactamaseinhibitors）是一类新的β-内酰胺类药物。质粒传递产生β-内酰胺酶，致使一些药物β-内酰胺环水解而失活，是病原菌对一些常见的β-内酰胺类抗生素（青霉素类、头孢菌素类）耐药的主要方式。β-内酰胺酶抑制剂（β-Lactamase inhibitors）是针对细菌对β-内酰胺抗生素产生耐药机制而研发的一类药物。它们对β-内酰胺酶有很强的抑制作用。虽然β-内酰胺酶抑制剂本身有抗菌活性，但抗生素作用极小，一般与β-内酰胺类抗生素同时使用。β－内酰胺酶抑制剂与相应抗生素联合用药能有效对抗临床耐药性的产生。目前临床应用的β-内酰胺酶抑制药复方制剂有阿莫西林/克拉维酸、替卡西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮-舒巴坦和哌拉西林-他唑巴坦。β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂对临床常见致病菌都有较强的抗菌活性，尤其对产β-内酰胺酶菌株引起的中、重度感染复合制剂的临床疗效显著提高。随着对β-内酰胺酶抑制剂的深入研究，β-内酰胺类抗生素与酶抑制剂组成的复合制剂必将显现出更加广泛的临床应用价值。

应用^[4][5]

用于TFDG对B类β-内酰胺酶活性的抑制作用研究

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,金葡菌)广泛存在于自然环境中,可引起多种危及生命的恶性感染性疾病,如败血症、心内膜炎以及坏死性肺炎等等。金葡菌耐药性常年为相关感染性疾病治疗的障碍,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的广泛扩散更是为临床治疗带来了巨大的挑战。研究表明,将近90%的MRSA菌株具有多重耐药性,可对包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类以及氟喹诺酮类等抗生素在内的多种常见治疗药物同时耐药。甚至被视为MRSA首选治疗药物的万古霉素也已出现相应的耐药菌株,表明MRSA感染可能会面临着无药可用的局面。β-内酰胺酶是金葡菌对β-内酰胺类药物耐药的主要原因之一,可高效催化β-内酰胺环的水解过程,使药物失去抗菌活性。

β-内酰胺酶的编码基因(bla)可被质粒携带扩散至多种致病菌中,形成耐药性的传播。β-内酰胺类抗生素自发现以来,一直是人类最为依赖的抗菌药物,每年使用量占抗生素总使用量的60%左右。然而,已有研究显示,临床中将近95%的金葡菌分离株拥有高效表达β-内酰胺酶的能力,严重影响了β-内酰胺类药物在相关感染性疾病中的应用。

目前临床中只有少数几种β-内酰胺酶抑制剂可辅助用于抗感染治疗,且均存在较大的局限性。现有的β-内酰胺酶抑制剂只可靶向A、C和D三类β-内酰胺酶,尚没有任何以B类β-内酰胺酶(Metallo-β-lactamases,MBLs)为靶点的抑制剂应用于临床治疗中,而近年来MBLs的大范围扩散已成为重要的耐药因素。本研究通过头孢硝噻吩水解实验和分级抑菌浓度实验发现茶黄素-3,3′-没食子酸酯(Theaflavin-3,3′-gallate,TFDG)可有效地抑制MBLs的水解活性,从而可显著地增加β-内酰胺类药物对MRSA菌株的抗菌能力。

参考文献

[1]Regulation of Virulence in Staphylococcus aureus:Molecular Mechanisms and Remaining Puzzles[J].Boyuan Wang,Tom W.Muir.Cell Chemical Biology.2016(2)

[2]Anticancer effect of black tea extract in human cancer cell lines[J].Katarína Koňariková,Miriam Je?ovi?ová,Ján Kereste?,Helena Gbelcová,Zdeňka?ura?ková,Ingrid?itňanová.SpringerPlus.2015(1)

[3]Mechanisms of Methicillin Resistance in Staphylococcus aureus[J].Sharon J.Peacock,Gavin K.Paterson.Annual Review of Biochemistry.2015

[4]Prevalence of blaZ gene types and the cefazolin inoculum effect among methicillin-susceptible Staphylococcus aureus blood isolates and their association with multilocus sequence types and clinical outcome[J].Y.P.Chong,S.‐J.Park,E.S.Kim,K.-M.Bang,M.-N.Kim,S.-H.Kim,S.-O.Lee,S.-H.Choi,J.-Y.Jeong,J.H.Woo,Y.S.Kim.European Journal of Clinical Microbiology&Infectious Diseases.2015(2)

[5]滕梓皓. TFDG对B类β-内酰胺酶活性的抑制作用[D].吉林大学,2018.