肝内胆管上皮细胞的应用

背景^[1-3]

肝内胆管上皮细胞(HIBEpiC)提取于人肝脏组织，于原代末期冻存。每管含有细胞数>5×105 cells/ml，此细胞通过Cytokeratin-18,-19 and Vimentin免疫荧光染色验证，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。细胞可以达到15倍增。

肝内胆管上皮细胞排列成肝内胆管树，在肝脏中形成不同直径的三维管道网。它们仅由3-5%的肝脏细胞组成，但每天产生的胆汁能多达总量的40%。大量研究表明，肝内胆管上皮细胞通过控制激素调控的分泌和吸收，在保持、调整和扩大胆小管的结构中发挥重要作用。肝内胆管上皮细胞在先天性和获得性免疫应答方面起着积极作用。比如：肝内胆管上皮细胞分泌趋化因子和细胞因子，通过表达重要的细胞粘附分子使免疫反应局部化。一般情况下，肝内胆管上皮细胞通过有丝分裂增值。然而，在某些条件下，肝内胆管上皮细胞会明显增生。

内皮细胞发挥多种生理功能，并且是许多病理过程的核心。肝脏包含两种截然不同的内皮细胞类型：血管和正弦波。正弦血管内皮细胞（SEC）是微血管内皮细胞，具有独特的表型，让人联想到树突状细胞，并具有独特的CD4+T细胞抗原呈递功能。因此，SEC代表了一种新型的器官驻留“非专业”抗原呈递细胞，似乎参与了肝脏免疫应答的局部控制和免疫耐受的诱导。

应用^[4][5]

用于TLR4通路诱导上皮间质转化在原发性胆汁性肝硬化中的作用研究

原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）是一种以肝内胆管上皮细胞损伤为主要特征的慢性、自身免疫性、胆汁淤积性肝病。该病以中老年女性多发，病因和发病机制尚不完全清楚。大量证据表明，PBC是以遗传为基础，由遗传和环境相互作用而产生的。一些临床和流行病学研究提示，泌尿道感染等因素可能与PBC的发病密切相关，是PBC发病的危险因素，但现有的研究结果并不完全一致，甚至个别研究的结果截然相反。

PBC患者肝内胆管上皮细胞（intrahepatic biliary epithelialcells，IBECs）TLR4表达明显上调，可能参与PBC的发病。泌尿道感染主要是革兰阴性细菌，其主要成分为脂多糖（LPS）。因此，我们有理由推测，LPS-TLR4通路在PBC向肝硬化、肝癌发展过程中具有重要作用。

TLR4通路对肝内胆管上皮细胞EMT的作用机制为进一步阐明TLR4通路异常活化在PBC进展过程中作用机制，体外培养肝内胆管上皮细胞，利用刮痕实验、趋化实验、细胞免疫化学、实时荧光定量PCR、MyD88及Snail小干扰RNA、抑制剂阻断、Western blot、萤光素酶报告等实验方法深入探讨LPS－TLR4信号通路活化对肝内胆管上皮细胞EMT的诱导作用及其具体分子机制。

结果显示10ug/ml LPS刺激肝内胆管上皮细胞24小时后，细胞迁移明显高于对照组，经过Transwell小室迁移的细胞数为110.4±9.17，明显高于对照组（75.8±7.78），差异均有统计学意义（P<0.01）。

参考文献

[1]Roles of p38 MAPK and JNK in TGF-β1-induced Human Alveolar Epithelial to Mesenchymal Transition[J].Hai-hua Chen,Xian-long Zhou,Yu-lu Shi,Jiong Yang.Archives of Medical Research.2013

[2]Genes,epigenetic regulation and environmental factors:Which is the most relevant in developing autoimmune diseases?[J].Karen H.Costenbader,Steffen Gay,Marta E.Alarcón-Riquelme,Luca Iaccarino,Andrea Doria.Autoimmunity Reviews.2011(8)

[3]Islet-1 is a dual regulator of fibrogenic epithelial-to-mesenchymal transition in epicardial mesothelial cells[J].Experimental Cell Research.2012

[4]Tumor necrosis factor superfamily member LIGHT induces epithelial–mesenchymal transition in A549 human alveolar epithelial cells[J].Yu Mikami,Yasuhiro Yamauchi,Masafumi Horie,Makiko Kase,Taisuke Jo,Hajime Takizawa,Tadashi Kohyama,Takahide Nagase.Biochemical and Biophysical Research Communications.2012(4)

[5]梁艳.TLR4通路诱导上皮间质转化在原发性胆汁性肝硬化中的作用研究[D].第二军医大学,2013.