WESTERN及IP细胞裂解液(无抑制剂)说明书

WESTERN及IP细胞裂解液(无抑制剂)产品说明^[1]

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等，Western 及IP细胞裂解液是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞，并获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western, 免疫沉淀(Immunol Precipitation， IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X- 100，低浓度 sodium pyrophosphate 等组成，不含蛋白酶、磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。用 Western及IP细胞裂解液(无抑制剂) (Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors) 得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的TritonX-100等干扰物质，不宜用Bradford法测定由Western及IP细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。

操作步骤^[1]

(一)贴壁培养细胞

1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。

2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3、按照6孔板每孔加入100~ 200L裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞1~5s内，细胞就会被裂解。

4、10000~12000g，离心3~ 5min(如果用冷冻离心机4℃离心效果更佳)，取上清。

5、进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)悬浮培养细胞

1、取Western及IP细胞裂解液室温溶解混匀，根据籍要选择添加或不添加蛋白酶抑制剂。

2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入100~ 200L裂解液的比例，加入Western及IP细胞裂解液。通常6孔板每孔细胞加入100吨裂解液已经足够，但如果

细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150~-200，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

4、10000~12000g， 4C离心3~5min (如无低温离心机，空温下离心亦可)，取上清。

5、进行后续的PAGE、 Western. 免疫沉淀等操作。

主要参考文献

[1] 张华昌，PTEN基因在唾液腺腺样囊性癌中的表达研究。《重庆医科大学》