人Α1Β糖蛋白(Α1Β-GP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人Α1Β糖蛋白(Α1Β-GP)ELISA KIT用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

糖蛋白（glycoprotein）是一种含有寡糖链的蛋白质，两者之间以共价键相连。其中的寡糖链通常是经由共转译修饰或是后转译修饰过程中的糖基化作用而连结在蛋白质上。

糖蛋白多肽链常携带许多短的杂糖链。它们通常包括N-乙酰己糠胺和己糖（常是半乳糖和/或甘露糖，而葡萄糖竟较少）。该链末端成员常常是唾液酸或L-岩藻糖。这种寡糖链常分支，很少含多于15个单体的，一般含2—10个单体，分子量相当于540—3,200。糖链数目也变化很大。

糖蛋白在动植物中较为典型，脊柱动物中糖蛋白尤为丰富，如金属转运蛋白（转铁蛋白）、血铜蓝蛋白，凝血因子、补体系统、一些激素，促卵泡素（Follicle-stimulating hormone,FSH，前脑下垂体分泌，促进卵子和精子的发育)、RNase、膜结合蛋白（如动物细胞膜的Na+-K+-ATPase）、主要组织相容性抗原（major histocompatibility antigen，细胞表面上介导供体器官与受体器官交叉匹配的标识）。绝大多数糖蛋白的寡糖是糖蛋白的功能中心。

应用^[4][5]

用于α1-B糖蛋白前体基因的原核表达及功能鉴定与CYP4F2基因的肾脏靶向表达研究

αl-B糖蛋白前体基因的原核表达及功能鉴定前言人类基因组计划已经初步完成,对人类功能基因的探索将是我们研究领域中的艰难任务。α1-B糖蛋白于1986年由Ishioka等人首次从人血浆中分离,从人胎肝cDNA文库中克隆了人α1-B糖蛋白前体基因,为研究此蛋白功能提供了方便路径。在前期研究中,通过对此基因表达谱及表达调控的研究,推测α1-B糖蛋白可以参与肝再生的进程,促进肝细胞增殖。

在进一步研究中,由于从血浆中分离纯化α1-B糖蛋白很困难,利用毕赤酵母表达系统尚未获得α1-B糖蛋白的高效表达,所以利用DNA重组技术,使α1-B糖蛋白在原核细胞中表达,用复性后重组α1-B糖蛋白处理细胞,结合流式细胞仪及MTT方法,观察对细胞增殖的影响。同时,重组α1-B糖蛋白为制备α1-B糖蛋白抗体,获得下游蛋白,及研究蛋白质间的相互作用奠定了基础。实验材料与方法PCR扩增α1-B糖蛋白前体基因,构建重组原核表达载体pET28-a(+)-α1-B,转化宿主菌BL21(DE3);诱导表达α1-B糖蛋白,将包涵体蛋白提取、纯化和复性后,做Western印迹鉴定;流式细胞仪和MTT检测分析重组α1-B糖蛋白对细胞增殖的影响。

参考文献

[1]甲胎蛋白维持肝癌细胞恶性增生的作用机制[J].李孟森,周升海.国外医学(肿瘤学分册).2003(06)

[2]人尿激酶原在大肠杆菌中表达的研究[J].王涛,周先碗,胡美浩.北京大学学报(自然科学版).2000(06)

[3]AMP Is a True Physiological Regulator of AMP-Activated Protein Kinase by Both Allosteric Activation and Enhancing Net Phosphorylation[J].Graeme J.Gowans,Simon A.Hawley,Fiona A.Ross,D.Grahame Hardie.Cell Metabolism.2013(4)

[4]Subclinical Hypothyroidism as a Risk Factor for the Development of Cardiovascular Disease in Obese Adolescents With Nonalcoholic Fatty Liver Disease[J].Ahmet Sert,Ozgur Pirgon,Ebru Aypar,Hakan Yilmaz,Dursun Odabas.Pediatric Cardiology.2013(5)

[5]聂栋.α1-B糖蛋白前体基因的原核表达及功能鉴定与CYP4F2基因的肾脏靶向表达[D].中国医科大学,2005.