人血管活性肠肽(VIP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人血管活性肠肽(VIP)ELISA KIT用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

ELISA试剂盒包含以下各组分：

（1）结合物及标本的稀释液；

（2）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；

（3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（4）酶的底物；

（5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），ELISA试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（6）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

血管活性肠肽，为脑肠肽，属神经递质。存在于中枢神经和肠神经系统中。食管下括约肌的舒张则是由迷走神经纤维末梢释放的VIP介导的，VIP又通过促进靶细胞合成NO而使平滑肌舒张。血管活性肠肽是从小肠粘膜提取的一种直链肽．由28个氨基酸残基组成．其排列为一部分胰高血糖素和催胰液素具有可使血管舒张降低血压的作用，从肝动脉开始，对内脏血管具有较强的作用能力，但对股动脉则全无作用。对肠液的分泌具有很强的促进作用．但对胰腺的分泌其促进作用很弱，对胃液的分泌可起抑制作用；对消化道平滑肌的收缩产生抑制作用，对血糖的增高作用较弱。

应用^[4][5]

用于血管活性肠肽、肿瘤坏死因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义研究

测定血管活性肠肽及其受体、肿瘤坏死因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达情况，探讨其在子痫前期发病过程中的作用。方法：选择轻度子痫前期（mild preeclampsia,MP）、重度子痫前期（severepreeclampsia,SP）各20例，选择同期与子痫前期组年龄和终止妊娠天数相匹配的单胎初产未临产剖宫产孕妇20例为对照组，采用免疫组织化学方法和ELISA法测定其胎盘组织中血管活性肠肽及其受体、肿瘤坏死因子的表达及定位，进行半定量检测并作比较。

结果：(1)血管活性肠肽及其受体在正常妊娠组、子痫前期轻度组、重度组中均有表达，且主要表达于胎盘合体滋养细胞、蜕膜细胞的细胞浆及细胞膜。

(2)在轻度子痫前期组与对照组相比，胎盘组织中血管活性肠肽及其受体的表达明显减弱，差异有统计学意义（P<0.01）；在重度子痫前期组与对照组相比，胎盘组织中血管活性肠肽及其受体的表达明显减弱，差异有统计学意义（P<0.01）；子痫前期重度组与轻度组相比，胎盘组织中血管活性肠肽及其受体的表达结果，差异有统计学意义（P<0.01），且随着病情加重，血管活性肠肽及其受体表达有下降趋势。

（3）在轻度子痫前期组与对照组相比，胎盘组织中肿瘤坏死因子的表达明显增强，差异有统计学意义（P<0.01）；在重度子痫前期组与对照组相比，胎盘组织中肿瘤坏死因子的表达明显增强，差异有统计学意义（P<0.01）；子痫前期重度组与轻度组相比，胎盘组织中肿瘤坏死因子的表达结果，差异有统计学意义（P<0.01）。

（4）血管活性肠肽与受体1及受体2呈正相关；血管活性肠肽与肿瘤坏死因子呈负相关。

参考文献

[1]Chrysin sensitizes tumor necrosis factor-α-induced apoptosis in human tumor cells via suppression of nuclear factor-kappaB[J].Xin Li,Qing Huang,Choon-Nam Ong,Xing-Fen Yang,Han-Ming Shen.Cancer Letters.2010(1)

[2]Intestinal infection with Giardia spp.reduces epithelial barrier function in a myosin light chain kinase–dependent fashion[J].Kevin G.–E.Scott,Jonathon B.Meddings,David R.Kirk,Susan P.Lees–Miller,AndréG.Buret.Gastroenterology.2002(4)

[3]Molecular pharmacology and structure of VPAC Receptors for VIP and PACAP[J].M Laburthe,A Couvineau.Regulatory Peptides.2002(2)

[4]The gene encoding vasoactive intestinal peptide is located on human chromosome 6p21→6qter[J].Illana Gozes,Rina Avidor,Yaakov Yahav,Daniel Katznelson,Carlo M.Croce,Kay Huebner.Human Genetics.1987(1)

[5]陈兰钦.血管活性肠肽、肿瘤坏死因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义[D].福建医科大学,2012.