醋酸艾替班特的制备

概述^[1]

醋酸艾替班特，英文名Firazyr，是由Shire公司研发的HAE专治药物，于2011年8月25日获FDA批准用于18岁及以上成年人的遗传性血管水肿急性发作治疗，也是FDA批准的第3个用于治疗HAE发作的药物。醋酸艾替班特有相似于缓激肽的结构d合成十肽，但是，其中有5个非蛋白源的氨基酸。

醋酸艾替班特是一种强力的选择性的缓激肽2型(B2)受体的选择性竞争性拮抗剂，通过抑制与HAE的栓塞局部肿胀、炎症、疼痛症状有关的缓激肽的影响而治疗急性HAE的栓塞局部肿胀。HAE只是醋酸艾替班特可能治疗的几种适应症的个，其他潜在适应症还有哮喘、肝硬化和其他类型的血管性水肿。所以说醋酸艾替班特具有很高的药用价值和广阔的市场前景。

制备^[2]

1：Fmoc‑Arg(Pbf)‑CTC树脂的制备

将11.1g替代度为0.9mmol/g的2‑氯三苯甲基氯树脂，加入到固相反应柱中，加入DMF溶胀树脂30分钟。向12.98g Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH中加入3.50mLDIPEA，活化5min，然后加入DMF溶胀的树脂中反应平衡10min，再加入3.50mLDIPEA，室温反应45min后，加入甲醇封闭20min。抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，然后用甲醇收缩3次，3次时间分别为3min、5min、8min，得到Fmoc‑Arg(Pbf)‑CTC树脂，检测替代度为0.5mmol/g。

2：Fmoc‑Oic‑OH的偶联

称取10mmol Fmoc‑Arg(Pbf)‑CTC树脂加入固相反应器中，用DMF溶胀0.5h，再用20％DBLK脱除Fmoc保护两次，每次时间分别为10min和5min，洗涤后连接Fmoc‑Oic‑OH。将11.73g Fmoc‑Oic‑OH、4.9g HOBt和6.1mL DIC溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护两次，每次时间分别为10min和5min，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

3：Fmoc‑D‑Cit‑OH的偶联

将11.91g Fmoc‑D‑Cit‑OH、5.00g HOAt和11.4gHATU溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下加入3.87gDIPEA活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

4：Fmoc‑Ser(tBu)‑OH的偶联

将11.49g Fmoc‑Ser(tBu)‑OH、5.00g HOAt和6.1mL DIC溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

5：Fmoc‑Thi‑OH的偶联

将11.79g Fmoc‑Thi‑OH、5.00g HOBt和11.37gHBTU溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下加入3.87gDIPEA活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

6：Fmoc‑Gly‑OH的偶联

将8.91g Fmoc‑Gly‑OH、5.00g HOBt和9.63gTBTU溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下加入3.63gTMP活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

7：Fmoc‑Hyp(tBu)‑OH的偶联

将12.27g Fmoc‑Hyp(tBu)‑OH、5.00g HOAt和9.66gTATU溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下加入3.63gTMP活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

8：Fmoc‑Pro‑OH的偶联

将10.11g Fmoc‑Pro‑OH、5.00g HOAt和11.4gHATU溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下加入3.87gDIPEA活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

9：Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH的偶联

将19.44g Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH、5.00g HOAt和11.4gHATU溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下加入3.87gDIPEA活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，洗涤后准备偶联下一个氨基酸。

10：Fmoc‑D‑Arg(Pbf)‑OH的偶联

将19.44g Fmoc‑D‑Arg(Pbf)‑OH、5.00g HOAt和11.4gHATU溶于DCM中(可以加入少量DMF助溶)，冰水浴下加入3.87gDIPEA活化7min后，加入固相反应器中，室温反应1～2h，反应终点以茚三酮法检测为准。反应结束后，抽掉反应液，DMF洗涤，再用20％DBLK脱除Fmoc保护，DMF洗涤3次，DCM洗3次，用甲醇收缩3次，时间分别为3min、5min、8min，真空干燥，得到醋酸艾替班特肽树脂。

11：醋酸艾替班特肽树脂裂解

配制裂解试剂200mL，其中三氟乙酸190mL，三异丙基硅烷6mL，水4mL放入冰箱中预冷30min。将20.0g醋酸艾替班特肽树脂加入到500mL圆底烧瓶中，然后将配制的200mL裂解试剂倒入树脂中，搅拌的同时冰浴，通入氮气，反应30min后撤走冰浴，室温下继续反应2h，过滤树脂，收集滤液。用少量三氟乙酸洗涤树脂，过滤，合并滤液。将滤液缓慢加入20L冰乙醚中，出现白色沉淀，3000转/分钟离心收集沉淀，冰乙醚洗涤5次后，减压干燥得到粗肽10.3g，HPLC检测纯度＞90％。

主要参考资料

[1] 雷蓓蕾, & 郭兆贵. . 缓激肽b2受体拮抗剂艾替班特降低卡托普和对培养新生大鼠心肌细胞 …. Acta Pharmacologica Sinica, 19(3), 241-244.

[2] 刘雪松, 刘冰洋, 王京晶, & 宋冬梅. . 治疗遗传性血管水肿新药艾替班特的药理作用与临床研究新进展. 中国新药杂志(4), 15-18.