人α甘露糖苷酶（αManase）ELISA试剂盒的试验原理

概述^[1]

人α甘露糖苷酶（αManase）ELISA试剂盒可用于测定人血清、血浆及相关液体样本α甘露糖苷酶（αManase）含量。

试验原理^[1]

人α甘露糖苷酶（αManase）ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知αManase浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将αManase和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中αManase的浓度呈比例关系。

操作步骤^[1]

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

主要参考文献

[1] 吴丽民 , 刘丽华 , 洪伟雄。稻瘟病菌一假定α-甘露糖苷酶多克隆抗体的制备及应用。《中国农学通报》