GENIUS™Nuclease核酸酶
Source
GENIUS™Nuclease核酸酶是粘质沙雷氏菌细胞外内切酶的重组形式，在大肠杆菌细胞中使用ACR-Obiosystems的专有工艺生产。GENIUS™Nuclease核酸酶是一种单体分子量约为30 kDa的同二聚体。核酸酶中发现的两个二硫键对其活性和稳定性至关重要。该酶是一种非特异性核酸酶，具有高比活性，可以降解任何形式的单链和双链核酸（单链、双链、线性、环状和超螺旋）。它将核苷酸之间的内部磷酸二酯键水解为长度为3-5个碱基的5'-磷酸化寡核苷酸。
Application
其高内在活性和广泛的底物耐受性使内切核酸酶成为各种生物技术和制药应用中的理想工具：从蛋白质样品中去除核酸（从重组蛋白质中去除核酸；从包涵体中纯化蛋白质片段；蛋白质印迹或二维凝胶电泳中的样品制备）；蛋白质提取物的粘度降低。
Operating conditions
GENIUS™Nuclease核酸酶在pH 6至10（最适pH 8-8.5）和0℃至42℃（最适35℃-42℃）之间有作用。酶活性需要Mg2+（1-2mM）。
在1mM MgCl2存在下，1mM EDTA使活性降低了30%；0.1 M EDTA消除了所有酶活。在1 mM MgCl2存在下，0.1 M CaCl2或1 M NaCl使酶水平降低了75%。在标准测定条件下，1 mM碘乙酸盐对酶速率没有影响，而1 mM巯基乙醇和马来酸仅使活性降低了5%至10%。10 mM苯甲酸对氯汞完全灭活酶，而在2 M尿素存在下，0.64 Mβ-巯基乙醇仅导致酶部分灭活。4或7M尿素增加酶活性。
Removal of GENIUS™Nuclease
GENIUS™Nuclease核酸酶没有“Tag”，用于下游加工的核酸酶可以根据靶蛋白的纯化策略通过各种纯化方法去除。
Formulation
在pH 8.0的Tris-HCl、MgCl2和NaCl中冻干。
Reconstitution
复溶说明和具体浓度见分析证书。
Purity
>95 % as determined by SDS-PAGE reduced GENIUS™Nuclease.
Enzyme Activity
>250U/μL
Activity Assay Procedure
1. Reagents and solutions preparation
Reaction buffer*:
50 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, pH 8.0 (*在使用前广泛稀释的情况下，通常建议使用0.1 mg/ml HSA或BSA等载体蛋白，以避免表面吸附造成的任何酶损失）
DNA Substrate:
将1mg/ml鲑鱼精子DNA在4℃下在反应缓冲液中溶解过夜，然后在冰上超声处理以获得均匀的溶液。
Enzyme:
用反应缓冲液对核酸酶进行不同稀释。
Stop reagent:
三氯乙酸（TCA）
2. Standard curve establishment
400μl底物+100μl已知活性的酶=500μl混合物
①将混合物在37℃下孵育30分钟。
②通过加入400μl冷TCA停止反应，并在冰上孵育10分钟。
③在8500g下离心5分钟。
④在260nm处测量上清液的吸光度。
⑤用已知活性的核酸酶绘制每组测量的标准曲线。
3. Measurement of activity
任何未知核酸酶的活性都可以通过标准曲线从一次测量中确定。GENIUS™核酸酶的比活性大于1.0 x 10e6单位/mg蛋白质。
Activity
上图为GENIUS™核酸酶的核酸酶活性标准曲线。
Unit Definition
一个装置将在37℃、pH 8.0的条件下，在30分钟内将超声波处理的鲑鱼精子DNA消化为酸溶性寡核苷酸，相当于ΔA260为1.0，这大约相当于完全消化37μg DNA。注意1 KU=1000 units.
Storage
避免反复冻融循环。
本产品在以下条件下储存后稳定。
冻干状态下1年（-20℃）；在无菌条件下（-70℃）复溶3个月。
注意：我们已将品牌名称从Benz™核酸酶更新为GENIUS™核酸酶。产品相同，仅有产品名称和标签中的品牌名称变化。
