绒毛膜促性激素

HCG（绒毛膜促性腺激素）是中六生殖中心医生们常使用的“妊娠试验”激素。HCG全部是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生。其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。 本品系由经乙型肝炎疫苗的健康人血浆或血清提取制得的冻干制剂，为白色或灰白色疏松体，液体制剂和冻干制剂溶解后，溶液应为接近无色或淡黄色的澄明液体，微带乳光。但不应含有异物或摇不散的沉淀。
本品含有正常人血中存在的抗体多种，主要为对抗麻疹、甲型病毒性肝炎、流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹、脊髓灰质炎、流行性乙型脑炎、疱疹、痘苗等病毒的抗体，亦含有少量的抗伤寒、百日咳、猩红热等细菌的抗体和抗白喉、破伤风的抗毒素。有增强体液免役的作用，主要用于病毒性疾病的预防。本品血清半衰期为18-20天，生物半衰期为340h。 预防麻疹，预防甲型肝炎及治疗丙种球蛋白缺乏症。 主要用于预防麻疹、传染性肝炎等。若与抗生素合用，可提高对某些严重细菌及病毒性感染的疗效。
IgG：抗菌、抗病毒、抗毒素、固定补体；
IgA：在局部黏膜抗菌、抗病毒；
IgM：溶血、溶菌、固定补体；
IgE：与I型变态反应有关。
最常见的不良反应是注射部位硬结和疼痛。 用于男性垂体机能不足所致的性机能过低症和隐睾症，用于由黄体功能不全引起的功能性子宫出血病和习惯性流产。与自马血清、绝经期妇女尿中提取的促性腺激素合用，可诱发排卵，治疗不育症。亦可治疗皮肤瘙痒症、神经性皮炎。
不良反应和禁忌：较多见为诱发卵巢囊肿或轻到中等度的卵巢肿大，腹部或盆腔剧烈疼痛、消化不良、浮肿、尿量减少、恶心、呕吐等。偶可发生男性早熟。较少见乳房肿大、头痛、易激动、精神抑郁、易疲劳等。有哮喘、癫痫、心脏病、肾功能损害者慎用。有垂体增生或肿瘤、性早熟、血栓性静脉炎等者禁用。 促性腺激素药。常用于性功能低下、习惯性流产、严重子宫出血、闭经、不孕症、隐睾症(但对解剖学病变引起的隐睾无效)。临用前，加灭菌注射用水适量使溶解。肌内注射，一次500-5000单位。
注意事项：高血压患者慎用。不宜长期使用。 促性腺激素药，用于性功能障碍、习惯性流产等病的治疗。 粗品制备 取孕妇尿，加苯甲酸乙醇饱和液，调节pH 4，进行吸附，再加95%的乙醇沉淀，洗脱，干燥得粗品。
孕妇尿[苯甲酸乙醇饱和液]→[pH4]吸附物[95%乙醇]粗制品
提纯、沉淀、精制、干燥 将上述粗品加醋酸钠缓冲液，15℃以下提取，丙酮沉淀，过滤，沉淀再加醋酸钠缓冲液提取，改用95%乙醇沉淀，过滤，沉淀物加利凡诺溶液进行处理，得处理液，把处理液加冷丙酮、冰醋酸后，得沉淀处理物。加醋酸胺、乙醇-冰醋酸混合液，分级沉淀，得沉淀物。加乙醚、水进行洗涤，水溶液层加乙醇，氢氧化钠，过滤，弃沉淀，上清液中加醋酸胺，磷酸钠，醋酸钙去热原，得去热原液，95%乙醇沉淀，五氧化二磷干燥得绒促性素精品。
粗制品[NaAc]→[15℃以下]提取液[冷丙酮]→沉淀物[NaAc]→提取液[95%乙醇]→沉淀物[利凡诺溶液]→处理液[冷丙酮，冰HAc]→处理物[NH4Ac,乙醇-冰 HAc]→沉淀物[水，乙醚]→水溶液[乙醇，NaOH]→上清液[NH4Ac, Na3PO4, Ca(Ac)2]→去热原液[95%乙醇]→沉淀物[P2O5]→促绒性素
注射用绒促性素的制备 将促绒性素成品按要求冻干得注射用绒促性素。
绒促性素[冻干]→注射用绒促性素。 方法一、苯甲酸吸附工艺
吸附、洗脱、干燥 按V_孕尿：V_{苯甲酸乙醇饱和溶液}：V_乙醇=1:0.075:5的配料比投料。孕尿用盐酸调pH 4-5，加苯甲酸乙醇溶液搅拌1h，静置2-3h，过滤，去上清液，得吸附物。95%乙醇搅拌洗脱至苯甲酸溶解有絮状沉淀生成。静置过夜离心，沉淀物用95%乙醇和丙酮洗涤，干燥得粗品。
孕妇尿[苯甲酸乙醇饱和溶液]→[pH 4-5]吸附物[95%乙醇]→粗制品
提取、沉淀 粗品悬浮于10倍量pH 4.8的1/15乙酸钠缓冲液，15℃以下提取2h，离心，沉淀物再提取1.5h，离心，合并提取液。搅拌下加入量为提取液9/11的冷丙酮，0.5h后，离心去沉淀，清液搅拌下加入量为清液3倍的冷丙酮，沉淀完全，虹吸去上清液，离心，沉淀用丙酮洗涤、干燥得沉淀物(可作兽用品)。
精制品[NaAc缓冲液]→[pH4.8,15℃以下]提取液[冷丙酮]→沉淀物
提取、醇沉淀 取沉淀物加50倍量pH 4.8的乙酸钠(1/15mol/L)缓冲液，低温搅拌提取3h，离心，滤饼加30倍量缓冲液再提取，合并滤液。加4倍量95%乙醇使沉淀，放置过夜，虹吸去上清液，离心，沉淀用丙酮脱水、干燥得沉淀物。
沉淀物[乙酸钠缓冲液]→[pH4.8]滤液[95%乙醇]→沉淀物
利凡诺处理、分级沉淀 取沉淀物加5倍量蒸馏水，碱调pH 6.8，搅拌缓加35倍量1%利凡诺液，静置，离心去沉淀。处理液用冰醋酸调pH 4.5，搅拌加入3倍量冷丙酮，放置2h离心，沉淀用丙酮脱水、干燥，即得利凡诺处理物。再将处理物溶于200倍量100g/L乙酸胺，调pH 6.5-7.0，搅拌缓加2.5倍的95%乙醇和0.25倍的冰醋酸混合液，冰箱中放置过夜，离心，沉淀用丙酮脱水，干燥，得沉淀物。
沉淀物[利凡诺溶液]→[pH6.8]处理液[冷丙酮，冰醋酸]→[pH4.8]处理物[乙酸胺，乙醇-冰醋酸]→[pH6.5-7]沉淀物
去热原、干燥 取沉淀物溶于25倍量水中，0.5mol/L盐酸调pH3.8，搅拌加等量乙醚洗涤，离心分层去乙醚。同法再用少许乙醚处理。水层稀释至投料量100倍，碱调pH至中性，加入等量95%乙醇，静止沉淀，离心。将上清液于冰浴，按清液每升加乙酸胺80g，搅拌溶解，加投料量8倍量0.2mol/L磷酸钠溶液，搅拌加8倍量0.3mol/L乙酸钙溶液，碱调pH 8.4，搅拌2h至沉淀析出。离心或过滤，滤液用盐酸调pH 6，加4倍量95%乙醇析出沉淀，冰箱过夜，去上清液得沉淀，离心。依次用95%乙醇、丙酮洗涤，放五氧化二磷干燥器干燥得成品。
沉淀物[水，乙醚]→[pH3.8]水溶液[乙醇，氢氧化钠]→[pH7]上清液[乙酸胺，磷酸钠，乙酸钙]→[pH8.4,2h]去热原液[95%乙醇]→[pH6]沉淀物[干燥]→[五氧化二磷]绒毛膜性激素[制剂冻干]→注射用绒毛膜促性激素
方法二、弱酸性硅酸铝吸附工艺
碱化、酸化 新鲜孕妇尿边加边搅拌滴加4mol/L NaOH，调pH 8-9，继续搅拌30min，静置1h，过滤，收集滤液，再在缓缓搅拌下，缓滴加6mol/L HCl，调pH 3-4，搅拌2h，静置2h，用厚滤纸过滤得酸化滤液。
新鲜孕妇尿[4mol/L NaOH, pH8-9]→[6mol/L HCl, pH3-4]酸化滤液
吸附 按每100kg尿液加入弱酸性硅酸铝湿颗粒(取50-80目弱酸性硅酸铝，加蒸馏水轻搅拌，静置30min，倒去悬浮在水中的细小颗粒，反复处理2次，过滤即得)2kg，慢搅拌吸附4h，静置1h，吸弃上清液，过滤，收集吸附后弱酸性硅酸铝，再加蒸馏水搅拌，装柱(10cm×100cm)，用蒸馏水洗涤(流速为5L/h)至洗涤液为中性，再用76%乙醇洗至五色。酸化滤液[弱酸性硅酸铝]→吸附物
洗脱、过滤 吸附物用10%醋酸胺-40%乙醇液洗脱(流速为1 L/h)，每100ml分步收集洗脱液，用妊娠诊断试剂半定量快速测定洗脱液HCG活性，合并含HCG活性洗脱液。用超滤膜(截流相对分子量为30万)超滤至原体积的1/3时，再补加蒸馏水至原体积，继续超滤，如此反复3次，最终至原体积的1/3即得浓缩液。
吸附物[10%乙酸胺-40%乙醇]→洗脱液[超滤]→浓缩液
除热原、干燥 浓缩液加入0.1 mol/L双氧水液，其最终浓度为0.001mol/L，放置3h，得除热原液，再用-20℃、2倍体积的无水乙醇沉淀，5000r/min离心，收集沉淀。将其用丙酮反复洗涤真空干燥，即得HCG精品。
浓缩液[双氧水，乙醇]→[-20℃]沉淀[洗涤，干燥]→HCG精品。 方法一、以人胎盘血为原料
样品处理 将人胎盘用无菌的剪刀剪去羊膜和脐带，剪碎胎盘，置灭菌的绞肉机中绞碎，得胎盘浆。每个胎盘，用无热原的40%氯化钠溶液(含0.5%苯酚)依次用500ml，250ml，250m1分三次浸渍。每次1h以上，充分搅拌。纱布过滤，合并滤液，2000r/min离心，除去红细胞，得浸渍液。
人胎盘（及产后血）[绞碎]→胎盘浆[NaCl]→[浸渍液]
盐析沉淀 取胎盘浸渍液加入等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌后放置1h以上，使球蛋白沉淀析出，帆布自然过滤，取沉淀。若颜色较深，可二次沉淀，使球蛋白再次析出沉淀，除去部分血红蛋白。1h后，帆布自然过滤，取沉淀压干。

沉淀、吸附、盐析 将沉淀按每个胎盘加无热原蒸馏水480ml，搅拌溶解。准确按每100ml溶液加100g/L硫酸铝钾液10ml，边加边搅，充分搅匀。当大量灰褐色沉淀生成时，调pH 4.2-4.4，放置1h，帆布过滤，收集滤液。取滤液，搅拌加入2mol/L NaOH溶液，调pH 7.8±0.1，搅15min，放1.5h，帆布过滤，压干沉淀，收集滤液。再按每升滤液加固体硫酸铵(CP)380g，搅拌溶解，调pH 6.8-7.2，放1h以上，帆布过滤，压干沉淀，收集沉淀。
沉淀物[硫酸铝钾]→[pH4.2-4.4]滤液[NaOH]→[pH7.8±0.1]滤液[硫酸铵]→[pH6.8-7.2]沉淀物
沉淀处理 沉淀包于玻璃纸透析袋，留一定容积，去空气，扎口，用流水透析，至硫酸铵含量低于1g/L为止。然后并瓶，即将透析液和冲洗透析袋的无热原水并于无菌瓶中，调pH 6.4-7，搅拌下依次加入氯化钠(固)、5%苯酚液、1%硫柳汞液，使其含氯化钠达0.85%、苯酚0.2%、硫柳汞0.005%。然后水浴加热至42-45℃，于30-60min后，放人2-10℃放置1-3个月。
沉淀物[对流水透析]→透析液[NaCl, 苯酚，硫柳汞]→[pH6.4-7,2-10℃]半成品
除菌灌封 沉淀后药液过滤至澄清，滤液测蛋白质含量。根据每批蛋白质的含量，以生理盐水稀释至浓度为55g/L(5.5%)，再补加防腐剂，使最后含酚量为0.2%，硫柳汞为0.005%。调pH 6.8-7.2，除菌过滤，取样测定，合格后无菌灌封，每支3ml。
半成品[pH6.8-7.2]→滤液[无菌灌封]→胎盘丙种球蛋白
方法二、以人血浆为原料
络合沉淀、盐析 同人血清蛋白，取利凡诺于pH 8.6沉淀后的上清液，置于反应罐，用盐酸(1mol/L)调pH 7.0，加硫酸铵结晶，搅拌，静置4h，虹吸去上清液，离心得沉淀物。
人血浆[利凡诺]→清液[硫酸铵]→[pH7.0]盐析沉淀物
超滤、除盐、沉降处理 盐析沉淀物加无热原蒸馏水溶解，过滤、澄清，超滤器浓缩、除盐，得浓缩液。浓缩液除菌后，于2-6℃静置一个月以上。
盐析物[水]→浓缩液[2-6℃, 一个月以上]→冷藏液
除菌、分装 冷藏液用不锈钢压滤器澄清过滤，再用Sartolis冷灭菌系统除菌，检查合格后，灌装得成品。
冷藏液[除菌、分装]→人血丙种球蛋白