如何检测和制备甲基睾酮？

背景及概述

甲基睾酮又叫甲睾酮。本品为合成雄激素。能促进男性性器官及副性征的发育和成熟;小剂量有对抗雄激素的作用，抑制子宫内膜生长;大剂量使子宫内膜萎缩，并抑制垂体前叶分泌促性腺激素;还具有明显的促进蛋白质合成、代谢的作用，促进钙、磷、钾离子的潴留，促进肌肉发育和骨质形成;骨髓机能低下时，较大剂量可刺激骨髓造血功能，促进红细胞的生成;还有增加远曲肾小管水、钠再吸收和保留钙的作用。用于睾丸素缺乏症的补充治疗及再生障碍性贫血、月经过多、功能性子宫出血、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、更年期综合征、老年性骨质疏松、转移性乳腺癌及卵巢癌等。口服或舌下含服：5～10mg/次，10～20mg/d; 小儿再生障碍性贫血，1～2mg/(kg•d)，1～2 次/d;外用： 涂搽1～2次/d。不良反应有头晕、恶心、水肿; 大剂量 (每月300mg以上) 或长期用于女性病人，可能引起声音变粗、毛发增多、痤疮、肌肉肥壮、阴蒂增大等男性化表现;对肝脏有较强的肝毒性，易引起中毒性肝炎或肝肿瘤，因而不适宜长期替代治疗。本品与华法令、香豆素抗凝血药合用，可延长和增加后者的抗凝血作用;与组胺药、苯巴比妥、保泰松合用，其疗效减弱。肝、肾功能不全及心脏病患者慎用;当发现男性化和肝功能障碍时应立即停药;有过敏反应者应停药;前列腺癌患者、孕妇及哺乳期妇女禁用。

检测

甲基睾酮（Methyltestosterone，MT），是一种人工合成的类固醇激素，具有增强雄性体性特征和促生长等作用。在水产养殖行业中为提高鱼体成活率高和增加产量，常在鱼苗培育过程中通过在鱼饲料或其它投入品掺入一定量的MT，实现鱼体的雄性化，达到单性养殖生产的目的。研究表明，MT在水产动物体内的代谢缓慢，痕量的残留可能会扰乱人体内 激素平衡，导致肝中毒或其它重要组织器官发生生理病变，甚至具有潜在致癌作用。因此，欧美等多个国家将其列为水产养殖中的禁用药物，我国农业部在2002年颁布的235号公告 《动物性食品中兽药最高残留限量》将其列为兽药残留的重要检测对象，规定在动物性食品的可食组织中不得检出MT。
目前，检测MT主要有高效液相色谱法(HPLC)，液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)、 气相色谱-质谱法(GC-MS)和免疫分析法(IA)等。
CN201611161344.6提供一种检测本发明的目的是提供一种检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒。本发明所提供的检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒，包括包被的水产品中甲基睾酮与载体蛋白的偶联物，所述水产品中甲基睾酮的特异性抗体和酶标二抗。为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括A，B，C ，D，E，F试剂液、G试剂液、H试剂液、I试剂液、J试剂液、K试剂液。所述A，B，C，D，E，F试剂液为甲基睾酮系列浓度标准溶液。本发明的检测原理为将甲基睾酮与载体蛋白的偶联物做包被原吸附于固相载体 上，加入样品和特异性抗体，再加入酶标二抗，待测样品中残留的甲基睾酮和固相载体上包 被的甲基睾酮与载体蛋白的偶联物竞争结合特异性抗体，显色后终止，测定样品吸光值，该 值与样品中甲基睾酮残留物含量呈负相关，与标准曲线比较即可得出甲基睾酮的含量。同 时根据酶标板上的样品颜色的深浅，与系列浓度的甲基睾酮标准溶液颜色的比较可判断样 品的浓度范围。
•本发明主要采用间接竞争ELISA方法定性或定量检测水产品中甲基睾酮的残留 量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批样品；最低检测限 达0.31 μg/L，可直接判断样品是否超标，具有高特异性、高灵敏度、高精确度、高准确度等特点，可在水产品中甲基睾酮残留检测中发挥重要作用。

制备

（1）3-位酮基保护
将4-雄烯二酮投入预先制备好的混合溶液中进行醚化反应，反应完毕，将醚化反应液加入到碳酸盐的水溶液中，加毕继续搅拌，抽滤，水洗得到醚化物湿料；
（2）17-位酮基格氏加成
将保护试剂加入甲苯中搅拌，投入上步反应湿料脱水，然后与格氏试剂进行格氏加成反应；
（3）3-位酮基去保护和17β-位水解
格氏加成反应结束，将用水稀释的无机酸滴加入格氏加成反应液中，加毕继续水解保温反应，反应结束，去除溶剂，抽滤、水洗、干燥、精制得到甲睾酮。

主要参考资料

[1] 内科学•第二卷

[2] [中国发明] CN201611161344.6 一种检测水产品中甲基睾酮的酶联免疫试剂盒

[3] [中国发明] CN201510787680.0 一种甲睾酮的制备方法