人肾管状上皮细胞提取物的应用

背景^[1-6]

人肾管状上皮细胞提取物离自人肾管状上皮细胞，人肾管状上皮细胞分离自健康人肾脏管状上皮组织。人肾管状上皮细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

人肾管状上皮细胞来源于人肾组织。肾是人和高等动物的造尿器官，左右各一，呈蚕豆形，位于腹后壁腰椎两侧，为脂肪组织包围和衬托，表面有纤维膜层覆盖，膜内即肾实质，分皮质和髓质两部分。

皮质在外，主要结构为肾小体和肾小管。肾小体的主体为动脉性毛细血管球，外面包着一个薄壁的小球囊，囊腔直接与肾小管相通。髓质在内，由15～20个肾锥体组成，锥体尖端称肾乳头，伸入肾盏，由此连通肾盂。肾的凹缘相对，为肾的血管、淋巴管、神经和输尿管出入之处，称肾门。

出入肾门的诸结构全称肾蒂，右侧较短，故右肾较左肾难以施行手术：受肝脏影响，右肾较低，第12肋斜过两肾后部(右肾上部，左肾中部)，腰部钝挫伤易使肾受损，右肾尤甚。人肾管状上皮细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，必须恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态。人肾管状上皮细胞冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

应用^[7][8]

人肾管状上皮细胞提取物可用于P66Shc介导的线粒体动力学变化在糖尿病肾病肾小管氧化损伤中的研究：

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是慢性肾脏病中最常见的继发性病因,也是引起终末期肾脏疾病(ESRD)的主要原因之一。肾小管细胞的氧化损伤和凋亡是DN早期的主要临床特征之一,其发病机制尚不完全清楚。近期研究证明：线粒体形态功能异常引起的线粒体动力学变化和线粒体ROS的过量产生在其中可能起着关键作用,且两者关系密切。衔接蛋白p66Shc是诱导细胞氧化应激和凋亡,以及调节生命周期的信号转导途径的重要分子。在高葡萄糖刺激下,p66Shc被激活并转位至线粒体,引起线粒体ROS过量产生并介导肾小管细胞的氧化损伤和凋亡。

患者肾活检组织常规病理染色显示：与对照组微小病变患者比较,DN患者肾组织有明显结节性或弥漫性肾小球硬化,肾小管可见空泡变性和基底膜增厚,并有明显小管硬化和萎缩。电镜示DN患者肾小球较之对照组,基底膜增厚以及肾小管细胞线粒体形态结构出现显著片段化改变(P<0.05)；DHE染色显示DN患者肾组织ROS水平明显升高；免疫组化和免疫荧光检测证实：与对照组比较,p66Shc和Drp1蛋白表达明显升高,而Mfn1的表达降低(P<0.05)。

参考文献

[1]Altered Mitochondrial Dynamics Contributes to Endothelial Dysfunction in Diabetes Mellitus[J].Sherene M.Shenouda,Michael E.Widlansky,Kai Chen,Guoquan Xu,Monika Holbrook,Corey E.Tabit,Naomi M.Hamburg,Alissa A.Frame,Tara L.Caiano,Matthew A.Kluge,Mai-Ann Duess,Aaron Levit,Brian Kim,Mor-Li Hartman,Lija Joseph,Orian S.Shirihai,Joseph A.Vita.Circulation.2011(4)

[2]Oxidative Stress and Diabetic Complications[J].Ferdinando Giacco,Michael Brownlee.Circulation Research.2010(9)

[3]Therapeutic prospects for mitochondrial disease[J].Eric A.Schon,Salvatore DiMauro,Michio Hirano,Robert W.Gilkerson.Trends in Molecular Medicine.2010(6)

[4]Cell death:Insights into the ultrastructure of mitochondria[J].C.Ulivieri.Tissue and Cell.2010(6)

[5]Mutation of the protein kinase A phosphorylation site influences the anti-proliferative activity of mitofusin 2[J].Wei Zhou,Kuang-Hueih Chen,Wenjing Cao,Jingwei Zeng,Hua Liao,Li Zhao,Xiaomei Guo.Atherosclerosis.2010(1)

[6]Oxidative stress,mitochondrial bioenergetics,and cardiolipin in aging[J].Giuseppe Paradies,Giuseppe Petrosillo,Valeria Paradies,Francesca M.Ruggiero.Free Radical Biology and Medicine.2010(10)

[7]The Protective Role of Nrf2 in Streptozotocin-Induced Diabetic Nephropathy[J].Jiang,Tao,Huang,Zheping,Lin,Yifeng,Zhang,Zhigang,Fang,Deyu,Zhang,Donna D.Diabetes.2010(4)

[8]詹明.P66Shc介导的线粒体动力学变化在糖尿病肾病肾小管氧化损伤中的研究[D].中南大学,2012.