大鼠主动脉平滑肌细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠主动脉平滑肌细胞分离自主动脉组织；主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为：升主动脉起于左心室，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉，以上为胸主动脉，至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内、外动脉。

主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

生理功能^[4-5]

主动脉平滑肌细胞在心血管疾病发生、发展中具有重要作用，以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象，探讨心血管疾病相关发病机制是目前研究的热点；体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

大鼠主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

应用^[6][7]

用于中链甘油三酯、三油酸甘油酯对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

甘油三酯，又称为脂肪，是体内能量的主要来源，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，根据其碳链长度的不同可被分为：1)短链甘油三酯(Short Chain Triglycerides,SCT)：碳链上的碳原子数小于6的甘油三酯；2)中碳链甘油三酯(Medium Chain Triglycerides,MCT)：碳链上的碳原子数介于6～12的甘油三酯；3)长碳链甘油三酯(Long ChainTriglycerides,LCT)：碳链上的碳原子数大于12的甘油三酯。高甘油三酯血症是指血浆甘油三酯≥150mg/dl(即≥1.7mmol/L)。流行病学的研究结果表明高甘油三脂血症可增加心血管疾病的患病风险。

动脉粥样硬化是最常见的一种血管病变，血管平滑肌细胞增殖是其显著性的临床病理学特征。长链甘油三酯是体内脂肪的主要成分，有研究表明氧化的富甘油三酯的低密度脂蛋白(ox-LDL)与血管平滑肌细胞的增殖有关，中链甘油三酯能降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平，并能抑制动脉粥样硬化过程中促炎因子的产生。但是，中链甘油三酯，三油酸甘油酯对血管平滑肌细胞增殖的影响，迄今未见报道。以大鼠主动脉血管平滑肌细胞为研究对象，以中链甘油三酯、三油酸甘油酯为处理因素，观察二者对主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响，观察其时效、量效的关系，为临床合理控制高甘油三酯血症提供基础实验研究证据。

方法

1.实验分组：中链甘油三酯及三油酸甘油酯分别设置六个剂量组：62.5mg/dl组、125mg/dl组、250mg/dl组、500mg/dl组、1000mg/dl组，2000mg/dl组，同时，设置一个对照组；每组均观察共六个时间点：24h、48h、72h、96h、120h、144h。

2.构建大鼠主动脉血管平滑肌细胞培养体系，进行细胞鉴定。

3.油红染色法观察脂质浸润情况及细胞形态的变化。

4.按照上述实验分组及时间点的设置，分别用含不同浓度的中链甘油三酯及三油酸甘油酯的培养基，培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，用MTT法检测大鼠主动脉血管平滑肌细胞的生长活力。

5.同样的实验分组和时间点设置，分别用含不同浓度的中链甘油三酯及三油酸甘油酯的培养基，培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,用流式细胞仪检测大鼠主动脉血管平滑肌细胞的生长周期。

6.同样的实验分组和时间点设置，分别用含不同浓度的中链甘油三酯及三油酸甘油酯的培养基，培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,用流式细胞仪检测大鼠主动脉血管平滑肌细胞的凋亡百分比。

参考文献

[1]Effects of fibrates on cardiovascular outcomes:a systematic review and meta-analysis[J].Min Jun,Celine Foote,Jicheng Lv,Bruce Neal,Anushka Patel,Stephen J Nicholls,Diederick E Grobbee,Alan Cass,John Chalmers,Vlado Perkovic.The Lancet.2010(9729)

[2]Contribution of High Plasma Triglycerides and Low High-Density Lipoprotein Cholesterol to Residual Risk of Coronary Heart Disease After Establishment of Low-Density Lipoprotein Cholesterol Control[J].Vincent J.Carey,Louise Bishop,Nancy Laranjo,Benjamin J.Harshfield,Carolyn Kwiat,Frank M.Sacks.The American Journal of Cardiology.2010(6)

[3]Apolipoprotein C-III and the Metabolic Basis for Hypertriglyceridemia and the Dense Low-Density Lipoprotein Phenotype[J].Chunyu Zheng,Christina Khoo,Jeremy Furtado,Frank M.Sacks.Circulation.2010(15)

[4]Apolipoprotein CIII Links Hyperlipidemia With Vascular Endothelial Cell Dysfunction[J].Akio Kawakami,Mizuko Osaka,Mariko Tani,Hiroshi Azuma,Frank M.Sacks,Kentaro Shimokado,Masayuki Yoshida.Circulation.2008(7)

[5]Acute hypertriglyceridaemia in humans increases the triglyceride content and decreases the anti-inflammatory capacity of high density lipoproteins[J].Sanjay Patel,Rajesh Puranik,Shirley Nakhla,Pia Lundman,Roland Stocker,Xiao S.Wang,Gilles Lambert,Kerry-Ann Rye,Philip J.Barter,Stephen J.Nicholls,David S.Celermajer.Atherosclerosis.2008(2)

[6]Mechanism of Action of Niacin[J].Vaijinath S.Kamanna,Moti L.Kashyap.The American Journal of Cardiology.2008(8)

[7]王雅琴.中链甘油三酯、三油酸甘油酯对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响[D].重庆医科大学,2014.