高熊果酚苷的含量测定

发布日期:2020/10/18 17:56:53

背景及概述^[1][2]

高熊果酚苷是一种植物提取物，主要存在于鹿蹄草科多种植物中，其中鹿蹄草科植物鹿蹄草 Pyrola calliantha H.Andres中含量丰富。现代研究表明，高熊果酚苷具有抗肿瘤作用，同时其也作为合成其它活性衍生物的原料。

制备^[1]

鹿蹄草为鹿蹄草科鹿蹄草属，具有补虚、益肾、活血、补气补血、止血、强筋骨、利尿、抑菌等功效。现在已知的鹿蹄草中活性成分包括，熊果苷、高熊果苷、高熊果酚苷、肾叶鹿蹄草苷、羟基肾叶鹿蹄草苷、熊果酸、梅笠草素、鹿蹄草素、2″-O-没食子酰基金丝桃苷、金丝桃苷、槲皮素、异槲皮素、没食子酸、儿茶素、表儿茶素、原儿茶酸和β- 谷甾醇等成分。

提取方法：取鹿蹄草全草，粉碎，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力20-40MPa，温度50-60℃， CO₂流量1-3ml/g生药·min，萃取时间80-120min，得萃取物，加入到大孔吸附树脂柱上吸附，60-80%乙醇洗脱，收集3-8倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，通过强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂吸附，以0.5mol/L的NaOH溶液洗脱，收集洗脱，滤过，通过强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂，收集流出液，滤过，浓缩，加入甲醇结晶，分离结晶，洗涤、干燥即得。

含量测定^[2]

石娟等人采用薄层扫描法对陕西产三个种的鹿蹄草Pyrola calliantha H.Andres，普通鹿蹄草 Pyrola decorataH. Andres和紫背鹿蹄草Pyrola atropurpures Franch 中的高熊果酚苷进行了含量测定。

1 对照品溶液及供试品溶液的制备

1 . 1 对照品溶液的制备：精密称取高熊果酚苷对照品，加甲醇制成每 1m L 约含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。

1 . 2 供试品溶液的制备: 取鹿蹄草、普通鹿蹄草和紫背鹿蹄草的干燥全草粉末各约 1g，精密称定，用甲醇索氏提取5h，提取液挥干溶剂，残渣用水 15mL 溶解，用正丁醇提取 3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2 色谱条件与扫描条件

2. 1 色谱条件: 采用以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板，以氯仿-甲醇( 10∶ 3)为展开剂，直立上行法展开，展开距离 10cm ，在紫外灯( 254nm) 下检视定位。

2 . 2 扫描波长的确定: 精密吸取对照品溶液、供试品溶液各 10μL，点于同一块薄层板上，展开，定位，在 200～400nm范围内做光谱扫描，由光谱图确定λ s =284nm，λ R=340nm 。

2 . 3 扫描条件: 双波长反射法锯齿扫描，外标两点法，散射参数 SX=3，狭缝 1. 2mm×1 . 2mm 。

3 线性关系考察

分别精密吸取高熊果酚苷对照品溶液 1.0，5.0，10.0，15.0，20.0μL点于同一薄层板上，按上述条件展开，晾干，紫外灯( 254nm) 下确定高熊果酚苷斑点位置，扫描测定。以点样量为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标，高熊果酚苷在1.004～20. 08μg 范围内线性关系良好。回归方程为Y =1738.23 +3746.12X，r =0. 9996。

4 精密度和重现性试验

精密吸取高熊果酚苷对照品溶液 5μ L，于同一薄层板上重复点样5个点，按上述条件展开，定位，扫描，测定积分值，其 RSD 为0.51 %(n =5)。精密吸取高熊果酚苷对照品溶液 5μ L 于5 个不同薄层板上点样。按上述条件展开，定位，扫描，测定积分值，其RSD 为2. 41 %(n =5)。取普通鹿蹄草约 1g，精密称定，共称 5 份，照“1. 2”方法分别制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液5μL和10μL，普通鹿蹄草供试品溶液各 10μL，以下按“7”方法操作，测定其中高熊果酚苷含量，其 RSD 为2. 13%(n =5)

5 斑点的稳定性试验

在硅胶 GF254薄层板上分别对高熊果酚苷对照品10μL斑点和普通鹿蹄草 10μL斑点进行稳定性考察，按上述条件展开，定位，每隔 1h 测定峰面积积分值。结果表明: 两者在5h 内稳定。对照品斑点 Y =40 628. 14，RSD=0. 79 % 供试品斑点 Y =24 473. 23， RSD=1. 43 %。

6 加样加收率试验

取已知含量的普通鹿蹄草粉末 0. 5g，精密称定，准确加入高熊果酚苷对照品溶液(1.004mg/ mL) 2 . 7mL，按“1.2”方法制备供试品溶液，依“7”测定，测定结果见表 1 。

7 样品测定

分别取鹿蹄草、普通鹿蹄草和紫背鹿蹄草约 1g，精密称定，按“1. 2”方法制备供试品溶液，分别点样 5，10，10μL，高熊果酚苷对照品溶液 5. 0μL 和10. 0μL，交叉点于同一薄层板上，按“2.1”色谱条件展开，晾干，确定斑点位置，扫描测定，按外标两点法计算供试品中高熊果酚苷的含量，测定结果见表2。