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高熊果酚苷的含量测定

发布日期:2020/10/18 17:56:53

背景及概述[1][2]

高熊果酚苷是一种植物提取物,主要存在于鹿蹄草科多种植物中,其中鹿蹄草科植物鹿蹄草 Pyrola calliantha H.Andres中含量丰富。现代研究表明,高熊果酚苷具有抗肿瘤作用,同时其也作为合成其它活性衍生物的原料。

制备[1]

鹿蹄草为鹿蹄草科鹿蹄草属,具有补虚、益肾、活血、补气补血、止血、强筋骨、利尿、抑菌等功效。现在已知的鹿蹄草中活性成分包括,熊果苷、高熊果苷、高熊果酚苷、肾叶鹿蹄草苷、羟基肾叶鹿蹄草苷、熊果酸、梅笠草素、鹿蹄草素、2″-O-没食子酰基金丝桃苷、金丝桃苷、槲皮素、异槲皮素、没食子酸、儿茶素、表儿茶素、原儿茶酸和β- 谷甾醇等成分。

提取方法:取鹿蹄草全草,粉碎,加入到CO2超临界萃取器中,乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%,萃取压力20-40MPa,温度50-60℃, CO2流量1-3ml/g生药·min,萃取时间80-120min,得萃取物,加入到大孔吸附树脂柱上吸附,60-80%乙醇洗脱,收集3-8倍量柱体积洗脱液,减压回收乙醇并浓缩,通过强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂吸附,以0.5mol/L的NaOH溶液洗脱,收集洗脱,滤过,通过强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂,收集流出液,滤过,浓缩,加入甲醇结晶,分离结晶,洗涤、干燥即得。

含量测定[2]

石娟等人采用薄层扫描法对陕西产三个种的鹿蹄草Pyrola calliantha H.Andres,普通鹿蹄草 Pyrola decorataH. Andres和紫背鹿蹄草Pyrola atropurpures Franch 中的高熊果酚苷进行了含量测定。

1 对照品溶液及供试品溶液的制备

1 . 1 对照品溶液的制备:精密称取高熊果酚苷对照品,加甲醇制成每 1m L 约含 1 mg 的溶液,作为对照品溶液。

1 . 2 供试品溶液的制备: 取鹿蹄草、普通鹿蹄草和紫背鹿蹄草的干燥全草粉末各约 1g, 精密称定, 用甲醇索氏提取5h, 提取液挥干溶剂, 残渣用水 15mL 溶解,用正丁醇提取 3次,每次20mL,合并正丁醇提取液,挥干溶剂,残渣用甲醇溶解并转移至10mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2 色谱条件与扫描条件

 2. 1 色谱条件: 采用以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板, 以氯仿-甲醇( 10∶ 3)为展开剂,直立上行法展开, 展开距离 10cm , 在紫外灯( 254nm) 下检视定位。

2 . 2 扫描波长的确定: 精密吸取对照品溶液、供试品溶液各 10μL,点于同一块薄层板上,展开,定位,在 200~400nm范围内做光谱扫描,由光谱图确定λ s =284nm,λ R=340nm 。

2 . 3 扫描条件: 双波长反射法锯齿扫描,外标两点法,散射参数 SX=3, 狭缝 1. 2mm×1 . 2mm 。

3 线性关系考察

分别精密吸取高熊果酚苷对照品溶液 1.0,5.0,10.0,15.0,20.0μL点于同一薄层板上,按上述条件展开,晾干, 紫外灯( 254nm) 下确定高熊果酚苷斑点位置,扫描测定。以点样量为横坐标, 斑点峰面积积分值为纵坐标, 高熊果酚苷在1.004~20. 08μg 范围内线性关系良好。回归方程为Y =1738.23 +3746.12X,r =0. 9996。

4 精密度和重现性试验

精密吸取高熊果酚苷对照品溶液 5μ L, 于同一薄层板上重复点样5个点, 按上述条件展开,定位,扫描,测定积分值,其 RSD 为0.51 %(n =5)。精密吸取高熊果酚苷对照品溶液 5μ L 于5 个不同薄层板上点样。 按上述条件展开, 定位,扫描,测定积分值, 其RSD 为2. 41 %(n =5)。取普通鹿蹄草约 1g, 精密称定,共称 5 份,照“1. 2”方法分别制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液5μL和10μL,普通鹿蹄草供试品溶液各 10μL, 以下按“7”方法操作, 测定其中高熊果酚苷含量,其 RSD 为2. 13%(n =5)

 5 斑点的稳定性试验

在硅胶 GF254薄层板上分别对高熊果酚苷对照品10μL斑点和普通鹿蹄草 10μL斑点进行稳定性考察,按上述条件展开,定位,每隔 1h 测定峰面积积分值。 结果表明: 两者在5h 内稳定。对照品斑点 Y =40 628. 14,RSD=0. 79 % 供试品斑点 Y =24 473. 23, RSD=1. 43 %。

 6 加样加收率试验

取已知含量的普通鹿蹄草粉末 0. 5g,精密称定,准确加入高熊果酚苷对照品溶液(1.004mg/ mL) 2 . 7mL,按“1.2”方法制备供试品溶液,依“7”测定, 测定结果见表 1 。

7 样品测定

分别取鹿蹄草、普通鹿蹄草和紫背鹿蹄草约 1g,精密称定,按“1. 2”方法制备供试品溶液,分别点样 5,10,10μL,高熊果酚苷对照品溶液 5. 0μL 和10. 0μL,交叉点于同一薄层板上,按“2.1”色谱条件展开,晾干,确定斑点位置,扫描测定,按外标两点法计算供试品中高熊果酚苷的含量,测定结果见表2。

主要参考资料

[1] CN201110150602.1 一种从鹿蹄草中提取高熊果酚苷的方法

[2] 石娟,刘瑞,陈慧娟,王军宪,岐琳.薄层扫描法测定不同种鹿衔草中高熊果酚苷含量[J].中国现代应用药学,2003(05):411-413.

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