固紫 B用于细胞染色

介绍

固紫 B的分子式为(C15H14N3O2)2·ZnCl4，外观为黄色结晶性粉末，可溶于极性及非极性溶剂。分子结构中含有三个偶氮基团（-N=N-），这些基团是染料的发色团，负责吸收特定波长的光，从而赋予染料颜色的特性。两个固紫 B分子通过锌离子（Zn2+）形成络合物，锌离子与四个氯离子（Cl−）配位，形成稳定的结构。

固紫 B

应用

固紫 B作为一种偶氮染料，在生物医学领域有着重要的应用，尤其是在细胞化学染色方面。本文将详细阐述其在骨髓基质细胞（BMSC）染色中的应用，以及其在临床诊断中的价值。

染色法的建立

固紫 B染色法的建立是为了更好地识别和计数骨髓基质细胞（BMSC）。BMSC是一类具有高度增殖、自我更新及多向分化潜能的细胞，在细胞与基因治疗中有着广阔的应用前景。然而，BMSC在骨髓中的含量非常少，每(0.1—1.0)×10^6个有核细胞中仅有1个基质细胞，传统的Wright-Giemsa染色后其形态不够显目，难以准确识别。为了克服这一问题，研究者们建立了固紫B盐细胞化学染色法。该方法通过优化固定液种类、固定时间、pH值、染色时间及缓冲液等参数，最终确定了使用pH 7.2—7.6的PBS缓冲液进行染色，使BMSC胞质染成紫红色，而胞核不着色，其他细胞（如粒细胞、红细胞、巨核细胞、单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞、间皮细胞等）均不染色。

染色操作步骤

第一步标本采集：吸取患者骨髓、胸腔积液或腹腔积液50μl制成涂片。健康对照者骨髓液2ml，采用Percoll密度梯度分离法分离并培养BMSC，细胞按1:3比例传代，传代培养4代后用胰酶消化，洗涤，得单个核细胞悬液，约3×10^6/ml，室温下560×g离心5min，弃上清液，细胞沉淀混匀，推片。

第二步固定：将新鲜干燥标本于固定液（95%乙醇溶液345ml，40%甲醛溶液55ml，蒸馏水10ml混合而成）固定30s，小水流冲洗后晾干。

第三步染色：将固定后的标本置入1g/L固紫 B的PBS溶液（pH 7.2—7.6），37℃水浴箱内置30min，流水冲洗1min，晾干后苏木精复染2min，流水冲洗，待干。

第四步镜下观察：在显微镜下观察细胞的着色情况及阳性BMSC形态特征，并计数贫血组、健康对照组和随机双盲法选取的150份骨髓标本全片的BMSC阳性数。

临床应用价值

研究发现，AA组BMSC计数为(1.07±0.29)个，增生性贫血组为(2.26±0.37)个，健康对照组为(1.58±0.33)个，AA组BMSC计数明显低于增生性贫血组和健康对照组（q值分别为24.29、8.83，P均<0.01），健康对照组低于增生性贫血组（q=16.41，P<0.01）。以健康对照组BMSC数的下限值作为AA的诊断界点，该方法诊断AA的敏感度为90%，特异度为93%，阳性似然比为12.86，阴性似然比为0.11。在一般的贫血患者中，BMSC数与骨髓增生程度有关，造血旺盛型BMSC数多于造血减低型。固紫 B染色法可以快速、准确地计数BMSC，从而评估骨髓的增生程度，对贫血的鉴别诊断具有重要的临床价值。

固紫B染色法的优势

整个操作过程仅需30分钟，染色明显，对陈旧标本也易着色，染色液配置后可较长时间保存，染色结果保留数月也不褪色。固紫 B染色后BMSC胞核不着色，胞质丰富，呈紫红色，而其他细胞均无此染色特征。与经典的流式细胞仪分析法比较发现，流式细胞仪法分类具有CD105/CD106/CD146细胞表面标记特征的细胞，固紫 B染色也呈阳性，表明它对BMSC染色具有较高的特异性。与流式细胞仪分析法、免疫细胞化学染色、荧光标记法等相比，固紫 B染色法成本低廉，易于在基层医院推广[1]。

参考文献

[1]GONG XU-BO,吴先国,卢兴国,等. 骨髓基质细胞固紫B盐染色法的建立及其临床意义[J]. 中华检验医学杂志,2008,31(8):890-893.