野黄芩苷的提取及含量测定

背景及概述^[1][2]

红盏花素又叫野黄芩苷，其植物来源有唇形科植物高黄芩的叶，黄芩的茎、叶以及半枝莲全草等。临床研究结果表明，野黄芩苷具有降低脑血管阻力，改善脑血循环、增加脑血流量及抗血小板凝集的作用，临床用于脑血管病后瘫痪的治疗。

纯化^[1]

一种新颖的纯化野黄芩苷的纯化方法，通过以下步骤实现：首先在一定温度下，将野黄芩苷粗品放入到一定量的溶剂中，用碱溶液调pH，直至野黄芩苷全部溶解于溶液中；然后通过蒸发或降温的方法析出结晶，过滤，洗涤，干燥，得到精制的野黄芩苷盐的中间体；重新选 择溶剂，将结晶状中间体产品溶于其中，加入适当的酸性溶液，调节溶液的pH，使野黄芩苷盐转变为野黄芩苷形式并从溶液中析出；再经过滤、洗涤、干燥，得到野黄芩苷结晶。

具体步骤以下：

（1）在40~60℃下，将野黄芩苷粗品按重量体积比1:5~1:20g/mL加入溶剂溶液中，用质量浓度为5~20%的碱溶液调pH至8.0~9.0，使野黄芩苷全部溶解，然后在4~10℃下放置结晶，经36~48小时后，过滤，用水洗涤，干燥，得中间体野黄芩苷钠盐或钾盐的结晶；

（2）在10~35℃下，将野黄芩苷钠盐或钾盐的结晶，按重量体积比1:10~1:20g/mL加入到溶剂溶液中溶解，用质量浓度为5~20%的碱溶液调pH至8.0~9.0使盐全部溶解，再用质量浓度为5~10%的酸溶液调pH至1.5~2.5，放置4~6小时, 过滤，用水洗涤沉淀，干燥，得到纯化的野黄芩苷结晶。

提取 ^[2]

从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法，包括以下步骤：

(1)将50kg黄芩茎叶(野黄芩苷的含量大约为0.5kg)粉碎至10目至200目，得到黄 芩茎叶粗粉末；

(2)按重量比1:8向黄芩茎叶粉末中加入浓度为50％的乙醇，加热至沸腾，提取2 次，每次1.5h，合并得到提取液；

(3)将上述提取液用滤布过滤后得到滤液，在温度为60℃、压力为 0.08MPa的条件下减压浓缩，去除滤液中的乙醇，即得到不含乙醇的野黄芩苷浓缩液；

(4)将野黄芩苷浓缩液，用10％的碳酸钠溶液调节pH值至7，过滤，得第二滤液，弃去沉淀物；

(5)向第二滤液中加入10％的盐酸溶液，调节pH值至1，静置36h，析出棕色沉淀物，倾出上层溶液；

(6)将倾出的上层溶液继续静置18h，析出土黄色沉淀物；

(7)分别取棕色沉淀和土黄色沉淀物合并后过滤，滤饼先用蒸馏水，再用乙酸乙酯洗至中性，得到混合沉淀物，然后在50℃的低温下干燥，即得到野黄芩苷粗品；

(8)向野黄芩苷粗品中加入20倍体积的浓度为95％的乙醇及野黄芩苷粗品重量的 1％的活性炭，加热至沸腾，提取1h，得到第二提取液，将第二提取液过滤，得到第三滤液，将 第三滤液浓缩至原体积的80％，静置使析出晶体，过滤，将所得晶体用浓度为45％的乙醇洗 涤5次，得野黄芩苷晶体；

(9)向上述野黄芩苷晶体中加入10倍体积的浓度为30％至50％的丙酮水溶液，摇匀，加入10％的盐酸调节pH值为2，静置后过滤，将沉淀物水洗至中性，干燥得到0.453kg高纯度的野黄芩苷。

含量测定^[3]

灯盏花素片是由菊科植物短葶飞蓬（灯盏细辛）Erigeron breviscapus(Vant.)Hand. -Mazz.提取物制成，主要成分为野黄芩苷（4′-羟基黄芩苷，又称灯盏花乙素）和少 量的灯盏花甲素，具有散寒解表、活血化瘀、通络止痛的功效，临床上用于中风后遗症、冠心病、心绞痛等的治疗。

一种测定灯盏花素片中野黄芩苷含量的方法，包括以下步骤：

（1）灯盏花素片供试品溶液的制备

取灯盏花素片，粉碎，取粉末20.0mg，精密称定，置于2mL的量瓶中，加入 氘代二甲基亚砜溶解并定容至刻度，精密移取1mL上述溶液置于2mL的量瓶中，加入1mL浓度为0.1mg/mL的3-三甲基硅基丙酸钠-d4的重水定容至刻度，混匀，14000rpm离心10分钟，取上清液，作为灯盏花素片供试品溶液；

（2）灯盏花素片供试品溶液的1H-NMR检测

取0.6mL步骤（1）所得的灯盏花素片供试品溶液，转移至5mm核磁管中密封，将核磁管置于核磁共振仪中，按以下条件进行1H-NMR检测：抑水峰序列zgcppr，观测频率600.23MHz，测定温度297.7K，谱宽12335.5Hz，90°脉冲宽度13μs，数据采样点65536，扫描次数16次，延迟时间15s，接受增益203，得到灯盏花素片供试品溶液的1H-NMR谱图；

（3）灯盏花素片供试品溶液中野黄芩苷的1H-NMR结构解析及定量峰的选择

根据灯盏花素片供试品溶液的1H-NMR谱图，对其化学位移和耦合常数进行归属，解析化合物为野黄芩苷，具体为δ7.93:2H,d,J=9Hz,H-2′,6′；δ6.98:3H,m,H-8, 3',5'；δ6.82:1H,s,H-3；δ5.22:1H,d,J=7.2Hz,H-1″；δ4.03:1H,d,J=9.6Hz,H-5″； 选取其中无干扰的质子信号峰1H或2H或3H作为野黄芩苷的定量峰；或选取其中无干扰的质子信号峰1H和2H，或1H和3H，或2H和3H作为野黄芩苷的定量峰；或同时选取其中无干扰的质子信号峰1H、2H和3H作为野黄芩苷的定量峰，其中质子信号峰1H、2H、3H的化学位移δ分别为6.82、7.93、6.98ppm；

（4）灯盏花素片中野黄芩苷的定量分析

按步骤（1）制备灯盏花素片供试品溶液，按步骤（2）进行1H-NMR检测，按步骤（3）所选定的定量峰采用内标法计算灯盏花素片中野黄芩苷的含量。

本测定灯盏花素片中野黄芩苷含量的方法，不仅具有简单快速、专属性强、重现性好等特点，而且无需被测化合物的对照品即可实现准确定量，可以弥补现有标准和其他定量方法的不足，可应用于灯盏花素片的质量控制。

主要参考资料

[1] CN201110143319.6 一种野黄芩苷的纯化方法

[2] CN201710806480.4 一种从黄芩茎叶中提取分离高纯度野黄芩苷的方法及野黄芩苷

[3] CN201410028292.X 一种测定灯盏花素片中野黄芩苷含量的方法