大鼠原代外根鞘细胞

背景^[1-6]

大鼠原代外根鞘细胞是由表皮延伸而来，主要分为外根鞘和内根鞘。其中，外根鞘相当于表皮的基底层和棘细胞层，由数层不含色素的细胞组成。外根鞘细胞与表皮细胞相比具有更强的增殖活性。此外，有研究表明，胰岛素与EGF对外根鞘细胞的增殖具有明显的促进作用。成熟毛囊由属于上皮部分的外根鞘与内根鞘和属于真皮部分的毛乳头与真皮鞘组成。

毛囊是角质形成细胞、黑素细胞和间质真皮细胞的干细胞库，已成为研究成体干细胞增生、迁移和分化、真表皮细胞间相互作用以及组织器官发育与再生过程的重要对象和工具。其中毛囊重建的研究对美容、药学、创伤愈合都有着重要影响。缺乏皮肤附属器和疤痕形成是目前组织工程皮肤替代物的共同缺陷。毛囊可能在提高皮肤创伤愈合速度、减少皮肤瘢痕形成、提高伤口愈合质量上起着重要作用。

毛囊真皮细胞在诱导表皮生长和真皮最后结构中有着重要的发育功能。毛囊隆突上皮细胞和毛囊真皮细胞的干细胞特性使毛囊来源的组织工程皮肤替代物有可能产生皮肤附属器。因此，用毛囊细胞来构建皮肤替代物以产生皮肤附属器的研究成为热点。

细胞特性

1组织来源于实验动物的正常皮肤组织。

2细胞鉴定：细胞角蛋白-19((CK-19)免疫荧光染色为阳性。

3经鉴定细胞纯度高于90%。

4不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。

应用^[7][8]

大鼠原代外根鞘细胞可用于毛囊真皮细胞在真皮替代物中诱导外根鞘细胞形成毛囊样结构的研究：

构建了细胞移植、细胞注射、条件器官型移植等多种毛囊重建模型，并成功地在特定部位(如肾包膜下)诱导产生了毛囊、毛发等皮肤附属器。但这些研究模型缺乏支架，诱导环境不是正常毛囊的生长环境，并不实用。随着组织工程技术的发展，以胶原凝胶为支架，更接近正常毛囊生长环境的皮肤替代物毛囊诱导模型应运而生。但单纯以各种毛囊来源细胞构建的双层皮肤替代物体外均未能诱导出毛囊样结构。移植后仅Gharzi的大鼠研究取得突破，成功诱导出毛囊和毛发。

Limat和Havlickova以Ⅰ型胶原成纤维细胞和／或毛乳头细胞凝胶为基础，在富含基底膜成分的细胞外基质Matrigel中，用毛乳头细胞和外根鞘细胞在体外诱导出囊肿样或梭形细胞团毛囊样结构，并对诱导产物进行了细胞增生、分化及培养基影响因素的研究。

毛囊形态发生的基本过程是：来源于真皮的起始信号启动局部表皮形成基板，基板发出的表皮信号反过来作用于间质，形成真皮细胞凝集团，在真皮细胞凝集团的信号作用下基板细胞增生形成毛囊胚芽，并继续向真皮中生长，包绕真皮细胞凝集团，使之发育成毛乳头，而上皮细胞发育成同心圆排列的各上皮细胞系，形成毛囊。这些信号中，β-catenin起着非常关键的毛囊发育起始诱导作用，而位于其下游的分泌型蛋白Sonic hedgehog(Shh)在表皮-间质信号中起主要作用，调节毛囊表皮增生和进一步向间质生长及毛乳头形成。

研究诱导产物的β-catenin和Shh表达，可以初步把握Wnt信号表达与诱导结构形成的关系。本实验对文献报道的繁琐毛囊真皮成分细胞分离方法进行了改进；对用毛乳头细胞、真皮鞘细胞和外根鞘细胞构建的双层皮肤替代物产生毛囊的可能性进行了探讨；并对毛乳头细胞、真皮鞘细胞复方壳多糖真皮基质凝胶基础上，真皮鞘细胞与外根鞘细胞的混合Matrigel凝胶(双层真皮替代物)诱导毛囊形成情况及裸鼠移植后的情况进行了组织学、免疫组化研究，并以包皮细胞来源的双层皮肤替代物、正常人毛囊、裸鼠皮肤(毛囊)为对照，进行了β-catenin、Shh免疫印迹蛋白表达分析。

参考文献

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