CA9-22(CA922)人口腔上皮癌细胞

背景^[1-6]

CA9-22(CA922)人口腔上皮癌细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外大学建系。CA9-22(CA922)人口腔上皮癌细胞属于人属上皮样贴壁生长细胞培养条件DMEM-H+10%FBS+1%PBS生长条件气相：5%CO2 95%空气温度：37℃冻存条件90%FBS+10%DMSO。

细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染，传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次。贴壁细胞:对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。

人口腔上皮癌,KB细胞培悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。

CA9-22细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

1.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若CA9-22细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

2.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

3.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[7][8]

CA9-22(CA922)人口腔上皮癌细胞可用于体外研究药物对癌细胞相互作用：

紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2/M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子调控机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制。

研究方法:克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同照射剂量对KB细胞生长抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比(SER)并评价增敏效果;流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因,在分析这些基因的基础上采用荧光定量PCR技术验证芯片提示的细胞分裂相关基因PRC1、Cyclin B2的变化。

结果:紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20nmol/l药物协同射线作用时SER Do及SER Dq分别为2.40±1.87、12.23±2.81。药物加照射处理后G1期细胞由48.32±2.40%下降为15.73±7.00%(P＜0.01),G2/M期细胞由13.66±2.16%上升到52.51±5.02%(P＜0.01),凋亡率与单纯加药组相比有所下降,为11.78±0.49%(P＜0.05)。基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用,其中上调表达2条,下调表达8条。

荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRC1和Cyclin B2均下调表达,与芯片结果一致。结论:紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRC1和Cyclin B2表达特异性下调,导致双极纺锤体形成受阻,细胞无法完成正常的分裂,形成多核细胞,从而使细胞增殖受到抑制并最终死亡。本课题应用基因芯片技术在分子生物学水平上进行基因筛选,寻找与放射增敏有关的基因,以期为肿瘤治疗及药物研究提供新的基因靶点,具有重要的指导意义。

参考文献

[1]Suppression of hepatitis B viral gene expression by protein-tyrosine phosphatase PTPN3[J].En-Chi Hsu,Yen-Cheng Lin,Chia-Shia Hung,Chiu-Jung Huang,Mei-Yi Lee,Shun-Chun Yang,Ling-Pai Ting.Journal of Biomedical Science.2007(6)

[2]A Mitotic Kinase TOPK Enhances Cdk1/cyclin B1-dependent Phosphorylation of PRC1 and Promotes Cytokinesis[J].Yasuhito Abe,Takashi Takeuchi,Lisa Kagawa-Miki,Norifumi Ueda,Kazuhiro Shigemoto,Masaki Yasukawa,Katsumi Kito.Journal of Molecular Biology.2007(2)

[3]PTEN enhances TNF-induced apoptosis through modulation of nuclear factor-κB signaling pathway in human glioma cells[J].Dimpy Koul,Yasunari Takada,Ruijun Shen,Bharat B.Aggarwal,W.K.Alfred Yung.Biochemical and Biophysical Research Communications.2006(2)

[4]Self-Assembled Biodegradable Nanoparticles Developed by Direct Dialysis for the Delivery of Paclitaxel[J].Jingwei Xie,Chi-Hwa Wang.Pharmaceutical Research.2005(12)

[5]Plant-based anticancer molecules:A chemical and biological profile of some important leads[J].Vandana Srivastava,Arvind Singh Negi,J.K.Kumar,M.M.Gupta,Suman P.S.Khanuja.Bioorganic&Medicinal Chemistry.2005(21)

[6]Cell-cycle-dependent regulation of the human and mouse Tome-1 promoters[J].Kenichi Yoshida.FEBS Letters.2005(6)

[7]Parc[J].Anatoly Y.Nikolaev,Muyang Li,Norbert Puskas,Jun Qin,Wei Gu.Cell.2003(1)

[8]翁婉雯.紫杉醇对人口腔上皮癌KB细胞放射增敏作用的分子机制研究[D].苏州大学,2009.