乳糖胆盐培养基的应用

背景^[1-3]

乳糖胆盐培养基（麦氏培养基）是指一种常用的鉴别培养基，能鉴别利用乳糖为碳源的革兰氏阴性细菌，常用来检测大肠菌群。配方如下：蛋白胨20g，乳糖10g，胆盐1.5g，NaCl5g（有时也可省略），溴甲酚紫1.01g（或中性红0.03g），水1000mL，调节pH至7.4。其中乳糖起选择作用，大多数细菌不能发酵乳糖（LacT），而大肠杆菌、肠杆菌、克雷伯氏菌等大肠菌群能发酵乳糖，如果细菌发酵产酸，含有溴甲酚紫指示剂的培养基会由紫色变为红色。

国内食品大肠菌群检测方法的国家标准规定：检测大肠菌群采用三步法、乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。其中乳糖发酵试验采用的是乳糖胆盐发酵管法，即液体麦氏培养基，可观察发酵后是否产酸产气，作为大肠菌群的初步筛选。

乳糖胆盐培养基检验原理：

蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求；牛胆盐可抑制革兰氏阳性细菌的生长；乳糖是大肠菌群可发酵的糖类；溴甲酚紫是pH指示剂，酸性呈黄色，碱性呈紫色。

乳糖胆盐培养基用法：

称取本品35.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装到有倒立发酵管的20mm×150mm试管中，每管10ml,121℃高压灭菌15分钟，备用。

乳糖胆盐培养基质量控制和典型特征：

在36±1℃培养24±2h，大肠菌群、大肠杆菌和发酵乳糖的革兰氏阴性细菌产生气体，在小倒管内有气泡；其它细菌无气泡。

应用^[4][5]

乳糖胆盐培养基可以用于从肠道微生态探讨清肠化湿汤治疗溃疡性结肠炎黏膜损伤的机制研究

通过体内外实验两种途径,证明清肠化湿汤可通过促进益生菌的生长及抑制致病菌的生长,恢复溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群微生态平衡,抑制肠黏膜损伤,为清肠化湿法治疗溃疡性结肠炎提供依据和支撑。

研究方法:1、体外实验:(1)将配置成0.5乳糖胆盐培养基浓度的双歧杆菌及鼠李糖乳杆菌菌液,分别接种于双歧杆菌BS培养基(不含琼脂)、MRS培养基及6.25%,12.5%,25%,50%浓度的清肠化湿汤培养基中,37℃厌氧培养双歧杆菌14h,16h,18h以及鼠李糖乳杆菌12h,14h,16h后,稀释10倍,测其吸光度OD57。,比较OD对照与OD实验值评估其对双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌体外生长的影响。(2)将已灭菌的浓度为3.8g/L(该浓度定义为100%)的清肠化湿汤提取液1mml与等体积营养肉汤混匀后加入24孔板第1孔中,以连续倍比稀释法稀释至第11孔,第12孔为不含清肠化湿汤的阳性对照组,以未接种大肠杆菌的相对应的中药培养基为空白组,加入0.5乳糖胆盐培养基浓度的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌,37℃恒温培养22h后,以目视比浊法观测抑菌效果,并于每孔中取适量混合液,以划线法37℃恒温箱中培养18h后观察杀菌效果。2、体内实验:将48只、雄性SD大鼠随机分成正常对照组,模型组,清肠化湿汤高、中、低剂量组,柳氮磺吡啶组,共6组。应用TNBS灌肠法制备溃疡性结肠炎大鼠模型,造模成功后,每天予清肠化湿汤高、中、低浓度及柳氮磺吡啶定时灌胃,持续12天后处死。通过对大鼠体质量、大便性状和隐血或肉眼血便情况进行评估疾病活动指数(DAI),肉眼观测肠道黏膜进行结肠黏膜损伤指数评分,并在显微镜下观察肠黏膜的病理改变。

乳糖胆盐培养基研究成果:1、6.25%、12.5%、25%、50%浓度的清肠化湿汤对双歧杆菌均具有促生长的作用(P<0.01),其中,25%浓度的清肠化湿汤促生长作用最明显。2、25%、50%浓度的清肠化湿汤在12h、14h时,对鼠李糖乳杆菌具有明显的促生长作用(P<0.01),但在16h出现抑制作用;6.25%、12.5%浓度的清肠化湿汤在12h时,对鼠李糖乳杆菌具有明显的促生长作用(P<0.05),在14h时促生长作用不明显(P>0.05),16h时出现抑制作用。3、清肠化湿汤对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有抑菌及杀菌作用,两者最低抑菌浓度依次为0.030g/L、0.007g/L,最低杀菌浓度依次为0.119g/L、0.238g/L;对沙门氏菌有抑菌作用,最低抑菌浓度为0.030g/L。4、清肠化湿汤可显著降低溃疡性结肠炎大鼠的DAI评分及结肠黏膜损伤指数评分,与模型组相比差异显著(P<0.05)。

参考文献

[1]Comparison of experimental mouse models of inflammatory bowel disease[J].Soo Oh;;Kyung-Ah Cho;;Jihee Kang;;Kwang Kim;;So-Youn Woo.International Journal of Molecular Medicine,2014(2)

[2]Reduced Diversity and Imbalance of Fecal Microbiota in Patients with Ulcerative Colitis[J].Hideyuki Nemoto;;Keiko Kataoka;;Hideki Ishikawa;;Kazue Ikata;;Hideki Arimochi;;Teruaki Iwasaki;;Yoshinari Ohnishi;;Tomomi Kuwahara;;Koji Yasutomo.Digestive Diseases and Sciences,2012(11)

[3]Increasing Incidence and Prevalence of the Inflammatory Bowel Diseases With Time,Based on Systematic Review[J].Natalie A.Molodecky;;Ing Shian Soon;;Doreen M.Rabi;;William A.Ghali;;Mollie Ferris;;Greg Chernoff;;Eric I.Benchimol;;Remo Panaccione;;Subrata Ghosh;;Herman W.Barkema;;Gilaad G.Kaplan.Gastroenterology,2012(1)

[4]Bifidogenic growth stimulator for the treatment of active ulcerative colitis:a pilot study[J].Asuka Suzuki;;Keiichi Mitsuyama;;Hironori Koga;;Nobuo Tomiyasu;;Junya Masuda;;Kosuke Takaki;;Osamu Tsuruta;;Atsushi Toyonaga;;Michio Sata.Nutrition,2006(1)

[5]李萍.从肠道微生态探讨清肠化湿汤治疗溃疡性结肠炎黏膜损伤的机制研究[D].北京中医药大学,2018.