胎牛血清的应用

背景^[1-7]

胎牛血清采用心脏封闭穿刺的方法采自孕6～8月孕龄的健康母牛腹中的胎牛。通过生物材料合成吸附技术和低温进行前期处理，去除细菌、病毒、支原体、抗体等影响血清质量的因素，然后再在净化车间中进行过滤分装。胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum,CS)采自出生10至14天的小牛。

组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

胎牛血清各项质量指标：1、性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。2、蛋白质含量3.5%～5.0%（w/v）3、血红蛋白含量≤0.02%（w/v）4、无菌检验阴性5、支原体检验阴性6、细菌内毒素≤5（EU/ml）7、牛腹泻病毒阴性8、大肠杆菌噬菌体阴性9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14)生长曲线（接种浓度）增殖浓度≥2.5×106个/ml细胞倍增时间≤15h,克隆率≥85%。

胎牛血清在细胞培养中的作用:

1.提供维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6. 提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

应用^[7][8]

胎牛血清可用于各类细胞培养，HepG2细胞培养：

在HepG2细胞培养方法与条件的探讨实验中对比40℃先溶解后3 7℃水浴恒温与传统3 7℃复苏方法效果以选择的复苏方法;观察不同比例胎牛血清培养基下细胞生长情况以确定的血清含量;观察不同汇合度下细胞生长趋势及死活细胞比例以选择恰当的传代时机;观察不同消化方法的消化效果以选择合适的消化方法。

结果40℃先溶解后3 7℃水浴恒温的复苏存活率(85.7%)明显高于传统3 7℃复苏方法(68.4%);在含12%以上胎牛血清的DMEM中细胞生长良好;汇合度达95%～10 0%时细胞生长趋势达到平台期,10 0%以后活细胞逐渐减少而死细胞逐渐增加;应用先PBS洗涤后0.2 5%胰酶消化的传代方法易于控制,消化效果好。结论HepG2细胞采取40℃先溶解后3 7℃水浴恒温的复苏方法,含12%胎牛血清DMEM培养基培养,采用先PBS洗涤后胰酶消化的方法于汇合度95%～10 0%时传代的方法进行培养,能获得培养效果。

参考文献

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