人神经髓鞘蛋白(p2)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人神经髓鞘蛋白(p2)Elisa试剂盒是一种用于体外定量检测人血清、血浆或其他生物液体中神经髓鞘蛋白p2浓度的免疫学检测工具。该试剂盒利用酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，通过特异性抗体与样本中的p2蛋白结合，并通过酶标记和底物显色反应来定量分析p2蛋白的水平。

神经髓鞘蛋白p2（也称髓鞘碱性蛋白MBP或髓鞘相关糖蛋白MAG）是神经系统中的一个重要组分，主要功能是维护神经纤维的绝缘性，并确保神经脉冲的有效传导。p2蛋白在多种神经疾病和损伤中表达水平会有所改变，因此其定量检测在神经病学研究中具有重要价值。

人神经髓鞘蛋白(p2)Elisa试剂盒

该试剂盒通常包含以下组成部分：

预包被的微孔板：其中包含已被神经髓鞘蛋白p2特异性抗体包被的孔，用于捕获样本中的p2蛋白。

样本稀释液：用于将待测样本稀释到适当的浓度。

标准品：已知浓度的p2蛋白，用于构建标准曲线，以计算样本中p2的浓度。

酶标记的抗体：特异性识别p2蛋白，并带有酶标记（如辣根过氧化物酶HRP），用于检测和放大信号。

底物溶液：在酶的作用下发生颜色变化，用以定量分析。

终止液：用于终止底物反应，通常为酸性溶液。

洗涤缓冲液：用于清洗微孔板，去除未结合的成分。

人神经髓鞘蛋白(p2)Elisa试剂盒操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人神经髓鞘蛋白(p2)Elisa试剂盒可以用于多发性硬化发病机制的研究

对多发性硬化复发缓解型27例(均为HLA-DR15型)的外周血单个核细胞，用T细胞增殖试验、富集粘附细胞法T细胞增殖试验、体外抗原诱导T淋巴细胞系、HPRT基因突变细胞系和T淋巴细胞单克隆株等方法，检测对人神经髓鞘、MBP、PLP及其合成多肽等19种抗原的增殖识别反应，在四个层次上使用了对照，得出了大量有价值的重要数据和结论。其中首次发现或/和重要的结果：1．找到了神经髓鞘类抗原的最佳浓度范围和较敏感的淋巴细胞增殖试验方法；2．探索了中枢神经髓鞘脂质对T细胞增殖能力的影响；3．经入神经髓鞘和脱脂人神经髓鞘两种相关又有别的抗原诱导TCL之间的比较，及实验组和对照组TCL的比较，发现MS患者体内可能有神经髓鞘异常脱脂，并在MS发病和病情迁延不愈方面起作用；4．在MS组筛选到较多HPRT突变细胞并证实这种T细胞在体内的活化和克隆扩增是针对自身神经髓鞘抗原的；5．经体外培养TCL抗原识别和HPRT基因突变细胞识别，使用人神经髓鞘蛋白(p2)Elisa试剂盒分别筛选出MBP、PLP、M87-106、P95-117、P40-60和P185-206等强免疫原，提示这些抗原及多肽位点可能与MS发病或病情加重有关；6．通过个例病情加重期与缓解期、成组复发期-缓解期、系列标本三个方面的研究均发现同一患者不同期的标本所显示的抗原表位增殖谱互不相同，之间几乎无相关性，展示出了MS“分子间抗原飘多发性硬化发病机制的研究内容提要移和分子内抗原飘移”的存在及对MS特征性的复发缓解病程的可能决定作用。

参考文献

[1]Pre-emptive targeting of the epitope spreading cascade with genetically modified regulatory T celis during autoimmune demyelinating disease.Yin L,Yu M,Edling AE,et al.J Immunol.2001

[2]Improving vaccine potency through intercellular spreading and enhanced MHC class I presentation of antigen.Hung CF,Cheng WF,Chai CY.J Immunol.2001

[3]YAP and TAZ regulate Schwann cell proliferation and differentiation during peripheral nerve regeneration.[J].Jeanette Haley;Marziali Leandro N;Bhatia Urja;Hellman Abigail;Herron Jacob;Kopec Ashley M;Feltri Maria Laura;Poitelon Yannick;Belin Sophie.Glia,2020

[4]Tissue Engineered Bands of Büngner for Accelerated Motor and Sensory Axonal Outgrowth[J].Panzer Kate V.;Burrell Justin C.;Helm Kaila V.T.;Purvis Erin M.;Zhang Qunzhou;Le Anh D.;O’Donnell John C.;Cullen D.Kacy.Frontiers in Bioengineering and Biotechnology,2020

[5]董万利.多发性硬化发病机制的研究[D].苏州大学,2002.