小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒是一种用于测定小鼠血清、血浆、组织等样本中TNF-β含量的实验试剂盒。该试剂盒使用双抗体夹心法测定样本中TNF-β的水平。

小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒

一、基本信息

产品名称：小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒

英文名称：TNF-βELISA Kit

用途：用于体外定量检测小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)的含量

保存条件：2-8℃，有效期一般为6个月

规格：常见规格有96T和48T

二、产品组成

小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒通常包含以下主要组件：

标准品

标准品稀释液

酶标包被板

链霉亲和素/HRP（辣根过氧化物酶标记的检测抗体）

20倍浓缩洗涤液

显色剂A液和B液

终止液

其他必要的辅助试剂和耗材

三、实验原理

该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)原理。往预先包被小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

四、实验步骤

实验步骤大致如下（具体步骤可能因试剂盒品牌和生产商而异）：

准备试剂和样本：将试剂盒和样本平衡至室温，准备所需的试剂和耗材。

加样：设置标准品孔、样本孔和空白孔，加入相应的标准品、样本和稀释液。

温育：将酶标板置于37℃恒温箱中温育一定时间（如60分钟）。

洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤酶标板数次，以去除未结合的杂质。

加检测抗体：向每孔加入HRP标记的检测抗体，再次温育。

显色：加入底物溶液，避光孵育一定时间后，颜色发生变化。

终止反应：加入终止液，终止显色反应。

测定OD值：用酶标仪在450nm波长下测定各孔的OD值。

计算浓度：根据标准品的OD值和浓度绘制标准曲线，计算样本中TNF-β的浓度。

应用^[4][5]

小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒可以用于精胺普鲁兰多糖-PLGA-CD3纳米粒的制备及其抗肝癌作用初步研究

目的1.合成精胺普鲁兰-乳酸-羟基乙酸共聚物的聚合物PS-PLGA,并制备表面耦联CD3抗体纳米粒PS-PLGA-CD3 NPs,阐明其对T细胞活力、细胞因子分泌及摄取效应的影响;2.探索PS-PLGA-CD3修饰Fe3O4的磁性纳米粒（MNPs）,与T细胞孵育后构建趋磁性T细胞的可行性,初步研究趋磁性T细胞的体内外趋磁靶向作用。

方法1.PS-PLGA-CD3 NPs的制备及理化性质表征。合成聚合物PS-PLGA,傅里叶近红外光谱、核磁共振氢谱仪对其结构进行表征;超声透析法制备PS-PLGA NPs,表面耦联CD3抗体制备PS-PLGA-CD3 NPs。透射电镜、纳米粒径和Zeta电位分析仪分别检测PS-PLGA NPs和PS-PLGA-CD3 NPs形态学特征;并采用荧光定量分析法检测其表面耦联CD3抗体含量。2.CCK-8法检测两种纳米粒（PS-PLGA NPs、PS-PLGA-CD3 NPs）对体外T细胞和Hep G2细胞活力的影响;通过小鼠溶血实验和急毒实验评价PS-PLGA-CD3NPs毒性作用。

3. 小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒ELISA试剂盒测定PS-PLGA-CD3 NPs对T细胞分泌γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）的影响;高内涵细胞成像仪与流式细胞仪分别检测T细胞和Hep G2细胞对纳米粒的摄取情况。

4. PS-PLGA-CD3 NPs修饰Fe3O4纳米粒制备修饰型磁性纳米粒（MNPs）,孵育法构建趋磁性T细胞;MTT法考察MNPs对T细胞活力的影响;小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒ELISA试剂盒测定MNPs对T细分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β的影响;流式细胞仪检测T细胞对MNPs的摄取情况;在磁场作用下,分别通过高内涵细胞成像仪和小动物光声活体成像仪,检测趋磁性T细胞的体内外趋磁性能。

小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒结果1.红外光谱和核磁共振氢谱证实成功合成PS-PLGA。PS-PLGA NPs和PS-PLGA-CD3 NPs形态均呈规整球形,粒径均一,粒径分别为121.9±20.3 nm和174.3±27.5 nm。精胺取代度为9.7%的PS-PLGA-CD3 NPs的抗体含量是52.1±9.4μg/mg。2.当浓度在1～200μg/m L之间时,PS-PLGA NPs体外对T细胞的细胞活力无显著影响,而PS-PLGA-CD3 NPs能够显著增强T细胞的细胞活力,并且随纳米粒浓度增加,细胞活力增强作用越明显。PS-PLGA NPs和PS-PLGA-CD3 NPs在浓度范围为5～1000μg/m L对Hep G2细胞的细胞活力均无显著影响;溶血结果显示,PS-PLGA-CD3 NPs无溶血作用;急毒试验结果表明,与对照组相比,在体重、摄食量及主要脏器病理切片均无明显差别。3.T细胞和Hep G2细胞均能有效地摄取PS-PLGA-CD3 NPs。与未耦联抗体组相比较,同一浓度的PS-PLGA-CD3 NPs显著促进T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β这三种细胞因子。4.一定浓度范围MNPs能被T细胞摄取并增强T细胞的细胞活力;显著促进T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β这三种细胞因子;在磁场作用下,趋磁性T细胞在体内外均表现出一定趋磁性能。

参考文献

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[5]陈宏洋.精胺普鲁兰多糖-PLGA-CD3纳米粒的制备及其抗肝癌作用初步研究[D].新乡医学院,2019.