免疫组化技术服务

背景^[1-6]

免疫组化技术服务是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的技术服务。免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC），即免疫组化，是利用免疫学中抗原抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（如多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。

免疫组化技术广泛应用于生物学检测领域，包括异常细胞的诊断，生物标志物的分布和定位研究，蛋白质在生物组织中不同部位差异表达的检测等。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。

石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。

常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。

实验步骤与服务内容

1.组织固定、石蜡包埋、切片制作。

2.切片脱蜡、水化。

3.抗原修复。

4.封闭内源性过氧化物酶和生物素。

5.正常山羊血清封闭。

6.抗体孵育、SP法染色。

7.DAB显色，苏木素复染。

8.显微镜数码拍照。

9.脱水、封片。

10.图片灰度计量分析。

应用^[7][8]

免疫组化技术服务可用于肿瘤相关性的Meta分析：

AKR1C3(aldo-keto reductase family 1 member C3,醛酮还原酶1C3),又称人类17β羟基类固醇脱氢酶5型,是醛酮还原酶超家族成员之一,是分子质量约37kda的单体蛋白,约含有320个氨基酸残基。AKR1C3为多功能酶,含3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、17β羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)以及3α羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)活性,参与雄激素、雌激素、黄体酮、前列腺素等的新陈代谢活动。

已有多项研究证实AKR1C3参与肿瘤内局部激素合成是肿瘤进展的机制之一。通过免疫组化的方法目前已在多种人体正常组织中发现AKR1C3的表达,如前列腺、乳腺、胃组织等。AKR1C3的免疫组化表达在多种肿瘤如前列腺癌、乳腺癌、胃癌、子宫内膜癌、肝细胞癌等组织中均有发现。AKR1C3在前列腺癌、胰腺癌、胃癌等组织中高表达,然而在某些病理类型的肿瘤如小细胞肺癌、乳腺癌等组织中低表达。

参考文献

[1]11β-Prostaglandin F2α,a bioactive metabolite catalyzed by AKR1C3,stimulates prostaglandin F receptor and induces slug expression in breast cancer[J].Tomomi Yoda,Kyoko Kikuchi,Yasuhiro Miki,Yoshiaki Onodera,Shuko Hata,Kiyoshi Takagi,Yasuhiro Nakamura,Hisashi Hirakawa,Takanori Ishida,Takashi Suzuki,Noriaki Ohuchi,Hironobu Sasano,Keely May McNamara.Molecular and Cellular Endocrinology.2015

[2]Pre-clinical activity of PR-104 as monotherapy and in combination with sorafenib in hepatocellular carcinoma[J].Maria R Abbattista,Stephen M F Jamieson,Yongchuan Gu,Jennifer E Nickel,Susan M Pullen,Adam V Patterson,William R Wilson,Christopher P Guise.Cancer Biology&Therapy.2015(4)

[3]Global cancer statistics,2012[J].Lindsey A.Torre,Freddie Bray,Rebecca L.Siegel,Jacques Ferlay,Joannie Lortet‐Tieulent,Ahmedin Jemal.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2015(2)

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[6]Postmenopausal breast cancer,androgens,and aromatase inhibitors[J].C.Campagnoli,P.Pasanisi,I.Castellano,C.Abbà,T.Brucato,F.Berrino.Breast Cancer Research and Treatment.2013(1)

[7]Critical evaluation of the Newcastle-Ottawa scale for the assessment of the quality of nonrandomized studies in meta-analyses[J].Andreas Stang.European Journal of Epidemiology.2010(9)

[8]叶思婷.AKR1C3免疫组化表达与肿瘤相关性的Meta分析[D].福建医科大学,2016.