BCAP-37人乳腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

BCAP-37人乳腺癌细胞是一种来源于48岁女性乳癌患者的人乳腺癌细胞系。这些细胞具有上皮细胞样的形态，并且在培养中表现为贴壁生长的特性。

细胞特性：

细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长；

细胞活力：通常高于90%，具体数值可能因供应商和批次不同而有所差异；

污染检测：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性，确保细胞的无菌状态。

BCAP-37人乳腺癌细胞广泛应用于科学研究领域，包括但不限于以下几个方面：

乳腺癌发病机制研究：通过BCAP-37细胞系，可以研究乳腺癌的发生、发展机制以及相关的基因表达和信号通路。

药物筛选与评估：BCAP-37细胞系可用于抗癌药物的筛选和评估，帮助研究人员发现新的治疗靶点和药物。

细胞生物学研究：BCAP-37细胞系还可用于细胞生物学的基本研究，如细胞增殖、分化、凋亡等过程的调控机制。

培养条件

培养基：常用培养基包括DMEM（高糖）+10%FBS，也有文献提及使用RPMI-1640（w/o Hepes）+10%胎牛血清。具体培养基配方可能因供应商和实验需求而有所不同。

培养温度与气体环境：37℃，5%CO2的恒温培养箱中培养

传代方法：首次传代建议比例为1:2-1:3，之后可根据细胞生长情况调整传代比例至1:3~1:6。传代时通常使用胰蛋白酶进行消化，使细胞脱壁后重新接种到新的培养瓶中。

BCAP-37人乳腺癌细胞

BCAP-37人乳腺癌细胞培养操作

1)复苏BCAP-37人乳腺癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)BCAP-37人乳腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)BCAP-37人乳腺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

BCAP-37人乳腺癌细胞可以用于去甲斑蝥素诱导的人乳腺癌细胞系Bcap-37的凋亡作用及其相关机制的研究

利用细胞体外培养技术,研究去甲斑蝥素(noncantharidin,NCTD)诱导BCAP-37人乳腺癌细胞凋亡的可能机制。

方法：采用MTT法检测NCTD对BCAP-37人乳腺癌细胞24h和48h的生长抑制作用,筛选药物最适浓度和最佳作用时间；AO/EB双染法、形态学观察来分析NCTD诱导乳腺癌细胞Bcap-37的凋亡变化；DNA凝胶电泳、彗星实验探讨细胞DNA的损伤情况；激光共聚焦显微镜技术检测NCTD对线粒体膜电位、细胞内活性氧等自由基以及Hsp70、Caspase-3蛋白表达的影响,并用流式细胞术分析NCTD诱导Bcap-37细胞凋亡与细胞周期变化的关系。

结果：1.BCAP-37人乳腺癌细胞MTT检测结果表明,NCTD在体外具有抑制Bcap-37细胞增殖的作用,降低细胞的存活率(p<0.01),具有明显的量效和时间依赖性,其最佳浓度在10μg/ml左右；AO/EB染色后,通过荧光显微镜可观察到细胞凋亡的形态特征,如细胞变圆、胞膜褶皱、核碎裂等,并出现凋亡小体。

2. BCAP-37人乳腺癌细胞流式细胞仪检测结果表明,NCTD可使G1期细胞比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例升高,细胞凋亡率上升。通过DNA琼脂糖凝胶电泳和彗星实验表明,一定浓度的NCTD能够对Bcap-37细胞的DNA造成损伤,发生拖尾现象,并可见以约200bp为基数的DNA片断组成的“梯状”条带。

3. NCTD可刺激BCAP-37人乳腺癌细胞线粒体膜电位ΔΨm降低,使细胞内ROS含量升高,并同时增强H2O2的生成,抑制CAT酶的活性。

4. NCTD作用24h后的细胞与对照组比较,抑癌基因蛋白Caspase-3的表达上调,差异有统计学意义(p<0.01)；热休克蛋白Hsp70的表达随药物浓度的变化而变化,与其对肿瘤细胞的双重调节功能吻合。

结论：1.NCTD对BCAP-37人乳腺癌细胞有较强的抑制增殖作用,呈时间-剂量效应关系；凝胶电泳结果可见细胞凋亡的典型DNA“梯状”条带和“彗星”拖尾现象。2.NCTD诱导Bcap-37细胞凋亡的机制与其干扰细胞周期有关,并呈现细胞周期阻滞现象。3.细胞内ROS含量增加,线粒体膜电位下降,显示线粒体氧化损伤途径可能是NCTD促进Bcap-37细胞凋亡的机制之一。4.NCTD通过调节Caspase-3、Hsp70蛋白的表达来实现诱导BCAP-37人乳腺癌细胞的凋亡说明NCTD能影响癌细胞某些基因的表达并改变酶的生理活性,从而发挥其抗肿瘤作用。

参考文献

[1]PHAPI,CAS,and Hsp70 Promote Apoptosome Formation by Preventing Apaf-1 Aggregation and Enhancing Nucleotide Exchange on Apaf-1[J].Hyun-Eui Kim;;Xuejun Jiang;;Fenghe Du;;Xiaodong Wang.Molecular Cell,2008(2)

[2]Norcantharidin inhibits DNA replication and induces apoptosis with the cleavage of initiation protein Cdc6 in HL-60 cells[J].Jin-Long Li;;Yu-Chen Cai;;Xu-Hui Liu;;Li-Jian Xian.Anti-Cancer Drugs,2006(3)

[3]Radiosensitization of tumour cells by cantharidin and some analogues[J].W.A.Price;;C.C.Stobbe;;S.‐J.Park;;J.D.Chapman.International Journal of Radiation Biology,2004(4)

[4]Mylabris phalerlata induces apoptosis by caspase activation following cytochrome c release and Bid cleavage[J].Jeong-Eun Huh;;Kyung-Sun Kang;;Kyoo-Seok Ahn;;Dong-Hee Kim;;Ikuo Saiki;;Sung-Hoon Kim.Life Sciences,2003(17)

[5]尹璇.去甲斑蝥素诱导的人乳腺癌细胞系Bcap-37的凋亡作用及其相关机制的研究[D].山东理工大学,2010.