大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒是一种用于检测大鼠样本中凝血因子IX（FIX）含量的实验工具。大鼠凝血因子IX ELISA试剂盒在生物医学研究、药物研发等领域具有广泛应用。例如，它可以用于研究凝血因子IX在凝血过程中的作用机制，以及评估相关药物对凝血因子IX水平的影响。大鼠凝血因子IX ELISA试剂盒是一种高灵敏度、高特异性、重复性好的实验工具，能够准确检测大鼠样本中的凝血因子IX含量。在使用过程中，需要遵循一定的操作规范和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒产品特点:

高灵敏度：能够检测极低浓度的大鼠凝血因子IX，通常具有较高的灵敏度。

高特异性：试剂盒中的抗体经过精心挑选和优化，确保不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

重复性好：试剂盒的板内、板间变异系数均较小，实验结果稳定可靠。

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒

使用大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒可以用于脱氢乙酸钠对大鼠肝细胞凝血因子的影响及Vkorc1/l1作用机制初探

在大鼠BRL3A肝细胞培养中,运用靶向大鼠Vkorc1/Vkorc1l1基因的siRNA,分别干扰VKORC1和VKORC1L1蛋白表达,研究脱氢乙酸钠对大鼠肝细胞凝血因子影响的VKORC1/VKORC1L1机制。在有效干扰目的基因的siRNA筛选中,首先利用荧光标记的阴性siRNA,筛选出合适的siRNA转染条件。将靶向Vkorc1和Vkorc1l1基因的各三条siRNA序列转染大鼠BRL3A肝细胞中,通过RT-PCR和Western blot检测,筛选出可有效沉默Vkorc1基因的siRNA序列为si403,蛋白水平上沉默效率为50%以上;可有效沉默Vkorc1l1基因的siRNA序列为si1,蛋白水平上沉默效率达70%。在检测不同浓度DHA-S对大鼠肝细胞活性和增殖情况的影响中,选择2.0、5.0、10.0 mmol/L脱氢乙酸钠处理大鼠BRL3A肝细胞24h后,MTT法检测细胞活性,EdU法检测细胞增殖。结果表明除了10.0 mmol/LDHA-S显著抑制肝细胞活性(P<0.05),极显著降低肝细胞增殖(P<0.001)外,其他剂量均无显著影响。以5.0 mmol/LDHA-S用于后续试验。在研究DHA-S对肝细胞凝血因子影响VKORC1/VKORC1LL1机制中,选择si403-siRNA和sil-siRNA分别靶向干扰Vkorc1和Vkorc1l1基因。siRNA转染BRL3A肝细胞24 h后,加入5.0 mmol/LDHA-S共处理,RT-PCR和Western blot检测VKORC1和VKORC1L1的mRNA水平和蛋白表达水平。使用大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒ELISA法检测细胞或培养上清中维生素K(Vitamin K,VK)和凝血因子IX(FIX)的水平。

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA试剂盒结果表明,①5.0 mmol/L DHA-S对BRL3A细胞活性、增殖和Vkorc1/Vkorc1l1 mRNA无显著影响,但能显著降低细胞中VK、FIX水平和VKORC1/VKORC1L1蛋白表达水平。②siRNA靶向干扰Vkorc1并与DHA-S共处理后,VKORC1的mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),VKORC1L1稍上升但无显著性差异,细胞或上清中VK、FIX显著降低(P<0.05)。与DHA-S组比较,共处理组培养上清及细胞中VK含量分别下降了约6.5%和8.0%,但与PBS组比较,共处理组培养上清及细胞中VK含量分别显著下降了约35.2%和11.7%(P<0.01);与DHA-S组比较,共处理组培养上清及细胞中FIX含量也分别下降约14.5%和4.1%,但与PBS组比较,共处理组培养上清及细胞中FIX含量,分别显著下降了约31.3%和12.3%(P<0.01)。③siRNA靶向干扰Vkorc1l1并与DHA-S共处理后,VKORC1无显著变化,VKORC1L1的mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.01),细胞和上清中VK、FIX也显著降低(P<0.01)。与DHA-S组比较,共处理组培养上清及细胞中VK水平分别降低约1.0%和3.8%;但与PBS组比较,共处理组培养上清及细胞中VK含量分别显著降低了约13.7%和12.4%(P<0.001)。与DHA-S组比较,共处理组培养上清及细胞中FIX水平分别降低约5.9%和4.2%(P<0.01);但与PBS组比较,共处理组培养上清及细胞中FIX分别显著降低了约11.7%和7.8%(P<0.001).

参考文献

[1]Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1-like 1(VKORC1L1)inhibition induces a proliferative and pro-inflammatory vascular smooth muscle cell phenotype[J].Al Zaidi M;Aksoy A;Repges E;Becher M U;Mueller C;Oldenburg J;Zimmer S;Nickenig G;Tiyerili V.European Heart Journal,2021

[2]Vitamin K-sources,physiological role,kinetics,deficiency,detection,therapeutic use,and toxicity.[J].Mladěnka Přemysl;MacákováKateřina;KujovskáKrčmováLenka;JavorskáLenka;MrštnáKristýna;Carazo Alejandro;Protti Michele;Remião Fernando;NovákováLucie.Nutrition reviews,2021

[3]Integrated analysis of miRNA-mRNA regulatory networks of potato(Solanum tuberosum L.)in response to cadmium stress.[J].Yang Xinyu;Kang Yichen;Liu Yuhui;Shi Mingfu;Zhang Weina;Fan Yanling;Yao Yanhong;Li Hong;Qin Shuhao.Ecotoxicology and environmental safety,2021

[4]The Role of Vitamin K in Humans:Implication in Aging and Age-Associated Diseases[J].Popa DanielaSaveta;Bigman Galya;Rusu Marius Emil.Antioxidants,2021

[5]陈玢霖.脱氢乙酸钠对大鼠肝细胞凝血因子的影响及Vkorc1/l1作用机制初探[D].扬州大学,2022.