人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒是一种用于体外定量检测人体样本中淋巴毒素α（LTA）浓度的免疫分析工具。它主要被应用在医学和生物学研究领域，通过酶联免疫吸附测定法（ELISA），该试剂盒能够准确、灵敏地检测血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液或细胞培养上清液等样本中的LTA水平。

人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒的主要组成包括：

酶标包被板：用于承载固相抗体，通常是微孔板，每个孔都预先包被了抗胰蛋白酶的抗体。

标准品：用于绘制标准曲线，帮助计算样本中AT的浓度。

酶标试剂：即HRP标记的抗体，与样本中的AT结合后形成复合物。

洗涤液：用于洗涤酶标板，去除未结合的成分。

显色剂：与酶标抗体反应后产生颜色变化，用于定量检测AT的浓度。

终止液：用于停止显色反应，以便进行OD值的测定。

人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒

使用人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒进行实验时，需要按照以下步骤进行：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，在生物医学研究、临床诊断等领域中得到了广泛应用。需要注意的是，在使用该试剂盒时，应仔细按照说明书进行操作，并注意样本的采集、保存和处理等细节问题，以保证实验结果的准确性和可靠性。

应用^[4][5]

人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒可以用于淋巴毒素α与急性冠脉综合征发病关系的研究

检测急性冠脉综合征患者及对照组淋巴毒素α(LTA)C804A、A252G基因多态性，并测定LTA、髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子(TNFα)、细胞间黏附因子(ICAM-1)水平，分析LTA804位点、LTA252位点基因突变与冠状动脉病变范围及炎症因子表达的相关性，进而探讨遗传因素、炎症反应与急性冠脉综合征发病关系。

方法：选择2007年9月至2008年12月，天津市第一中心医院心内科收治的急性冠脉综合征组病人106例，对照组80例，入选的所有病人入院后均接受冠状动脉造影检查，不稳定心绞痛或急性心肌梗塞病人的诊断均依据ACC／AHA指南。记录患者下列临床资料：年龄、性别、吸烟史、饮酒史、高血压史、冠心病家族史、甘油三脂、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、尿酸、空腹血糖水平等。根据冠状动脉造影结果分为急性冠脉综合征(ACS)组106例和对照组80例，ACS组根据其类型又分为不稳定型心绞痛(UAP)组和急性心肌梗塞(AMI)组。用人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒测定淋巴毒素α(LTA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO)、细胞间黏附因子(ICAM-1)水平，用DNA试剂盒提取DNA，利用多聚酶链反应(PCR)及琼脂糖凝胶电泳分析淋巴细胞毒素-α(LTA-α)基因C804A、A252G的基因多态性并进行测序。应用SPSS13．0数据统计软件对实验数据进行统计学分析。两组间定量资料进行正态性检验，正态分布资料采用均数±标准差((?)±s)表示，两样本均数比较采用t检验，多样本均数比较应用方差分析，组间比较采用q检验。计数资料以百分数表示，例数及率的比较采用x2检验。以P＜0．05为差异有统计学意义。

人淋巴毒素α(LTA)Elisa试剂盒结果：急性冠脉综合征组测定的TNF-α、MPO、LTA、ICAM-1水平高于对照组，其中AMI组TNF-α、ICAM-1水平高于UAP组(P＜0．05)。急性冠脉综合征组不同病变程度的TNF-α水平差异有统计学意义，多支病变高于单支病变(P＜0．01)。UAP组与AMI组测定的MPO、LTA无差异。急性冠脉综合征组不同病变范围测得的MPO、LTA、ICAM-1水平无显著性差异(P＞0．05)。LTA804位点存在CC、CA、AA3种基因型。急性冠脉综合征组与对照组LTA804位点基因型、等位基因频率比较无统计学差异(P＞0．05)。

参考文献

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