C-JUN抗体的应用

背景^[1-3]

C-JUN抗体是一个非偶联、分子量约36 kDa的兔源、抗C-JUN单克隆抗体。它可用于人、小鼠、大鼠背景下的多种实验，如WB（Western Blot，蛋白质印迹法）、ICC（免疫细胞化学）、IHC-P（免疫组织化学染色）和IP（免疫沉淀）等，并且不带标记。

C-JUN原癌基因属于bZIP家族核内转录因子成员之一，可以结合在许多基因的启动子上参与基因转录的调控。它可以与其他家族转录因子如TNF-α、PU.1、Sp1、fas、ras、C/EBP、ATF/CREB等相互作用，发挥协同效应。C-JUN的调控范围十分广泛，能被各组织中的多种化学物质激活并受其影响。

C-Jun氨基末端转移酶（JNK）是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族的一员，能够使C-JUN氨基末端活性区Ser63和Ser73发生磷酸化的蛋白激酶。这是促分裂原活化的蛋白激酶超家族中的一个家族，包括JNK1、JNK2、JNK3。当其活化模体Thr-Pro-Tyr内的Thr、Tyr被JNKK1、JNKK2磷酸化后而激活，活化酶可磷酸化C-JUN等多种蛋白质，从而影响细胞凋亡、炎症和肿瘤的发生。

C-JUN抗体

C-JUN通过与AP-1家族的其他成员(如FOS)形成异源二聚体来发挥作用。这种二聚体可以结合到DNA上的特定序列，从而调控基因的转录。C-JUN在多种生物过程中都有重要作用，包括细胞周期调控、细胞应激反应和肿瘤发生等。

C-JUN抗体的保存条件一般为-20℃条件下保存。大部分抗体比较合适分装后保存在-20度，但腹水形式的产品请在收到后立即冻起来，因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4度保存会导致抗体的降解。

应用^[4][5]

C-JUN抗体可以用于C-JUN转录调控FOXK1促进胃癌发生发展的机制研究

FOXK1为转录因子c-jun的转录激活靶点3.1 c-jun能与FOXK1的启动子区域结合并启动下游转录根据FOXK1启动子(600bp)内c-jun的三个潜在结合位点设计三对引物,扩增出FOXK1转录起始位点上游的三段启动子序列,分别插入到pGL3-Basic载体,构建出三个含不同结合部位的pGL3-FOXK1promoter(记为FOXK1p1,FOXK1p2和FOXK1p3)。将上述FOXK1p和c-jun表达质粒或对照质粒共转染至MKN28中,进行双荧光素酶检测并比较各组荧光素酶活性差异。另外利用染色质C-JUN抗体免疫共沉淀(ChIP)的方法,再次明确c-jun与FOXK1启动子结合及其大致结合位点。3.2 c-jun能与FOXK1启动子区域结合设计突变引物,以FOXK1p为模板进行扩增得到c-jun结合位点突变的产物,纯化并酶切突变产物,再将其与酶切后的pGL3相连,然后转化入感受态细胞扩增,将突变质粒测序以确定突变成功并将其命名为FOXK1-mut。双荧光素酶检测并比较野生型和突变型的荧光素酶活性以明确c-jun结合的具体位置。再将不同量(0,0.3,0.5,0.8,1.0μg)的c-jun表达质粒和FOXK1p共转染至MKN28中,以明确FOXK1启动子被激活的程度是否随c-jun表达水平的递增而上升。

FOXK1与c-jun的表达在胃癌中具有相关性且与胃癌患者的预后相关4.1 FOXK1与c-jun的表达在胃癌细胞系中具有相关性提取人胃癌细胞系AGS、SGC7901、MGC803、BGC823、MKN45、MKN28的细胞蛋白,用western blottingC-JUN抗体检测不同胃癌细胞中FOXK1和c-jun的表达水平,并用细胞免疫荧光检测FOXK1和c-jun两中蛋白的细胞内亚分布。4-2FOXK1与c-jun在胃癌组织中高表达且其表达具有相关性收集90例胃癌及其癌旁组织,定制组织芯片,利用免疫组化染色检测FOXK1和c-jun在胃癌及其癌旁组织的表达水平,并由两名病理医生对染色程度进行评分；对评分进行散点分布、线性回归及相关分析以比较FOXK1和c-jun在胃癌及癌旁组织的表达差异,以及明确两种蛋白表达上的相关性。4.3 FOXK1/c-jun表达与胃癌患者临床病理参数的关系运用卡方检验分析FOXK1/c-jun的表达水平与胃癌患者临床病理参数之间的关系。4.4 FOXK1/c-jun表达与胃癌患者预后的关系收集105例胃癌患者的随访资料,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线；应用单因素和多因素COX回归模型分析影响胃癌患者生存的独立预后因素。

参考文献

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[5]彭莹.c-jun转录调控FOXK1促进胃癌发生发展的机制研究[D].南方医科大学,2017.