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RNaseA核酸内切酶的介绍

发布日期:2019/4/16 13:54:38

背景及概述[1]

核酸内切酶是水解酶类中许多酶的共有名称(EC3.1.21~31)。但各有其专一性,它们催化水解多核苷酸(例如脱氧核糖核酸酶,脱氧核糖核酸内切酶,核糖核酸内切酶等)。该酶类对于DNA和RNA的代谢和修复十分重要。

RNaseA核酸内切酶是一种水解核糖核酸的酶。白色结晶或冻干粉末,也有50%甘油的稠状溶液。对湿敏感。极易溶于水。酶反应:专一地催化核糖核酸的核糖部分3′和5′磷酸二酯键的裂开,形成具有2′,3′-环一磷酸衍生物寡聚核苷酸。水溶液在25℃以下相当稳定,最大稳定范围pH2~4.5。最适pH7.7。最适温度65℃。等电点(pI)7.8。比旋光度[α]25D-0.47°(以每mG氮计,c=5,水中)。抑制剂有0.0005mol/L镁(MG2+)、脱氧核糖核酸(竞争性抑制剂)、变性脱氧核糖核酸(比天然的更有效)。RNaseA核酸内切酶来源于牛胰,为高度专一性核酸内切酶,可特异攻击RNA上嘧啶核苷酸的C′-3上的磷酸根和相邻核苷酸的C′-5之间的键,产物为3′-嘧啶单核苷酸或以3′嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸。可除去DNA:RNA或RNA:RNA杂合体中未杂交的RNA区;可用来确定DNA或RNA中单碱基突变的位置,用标记了的RNA探针与待检含单碱基置换的DNA或RNA退火,RNA:RNA或RNA:DNA中的错配碱基可被RNaseA切割。RNaseA核酸内切酶被广泛用来去除DNA样品中的RNA。RNaseA核酸内切酶配制方法为不含DNA酶的RNaseA溶液的配制,将RNaseA溶解在0.001mol/l醋酸钠(ph5.2)中,使终浓度为10mg/ml,加热到100°C,15min。室温下缓慢冷却,用0.1体积的1M的Tris-Cl调整pH至7.4后,小管分装保存在-20°C。

主要参考资料

[1] 诊断学大辞典