人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒是一种专门用于测定人血清、血浆、组织匀浆等相关液体样本中人γ肽（Pγ）含量的实验工具。它基于酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理，通过抗原与抗体的特异性结合，以及酶促反应产生的颜色变化，来定量检测样本中的人γ肽含量。

人γ肽(Pγ)ELISA试剂盒原理：ELISA试剂盒基于抗原-抗体特异性结合的原理工作。待测样品中的γ肽(Pγ)与预包被在微孔板上的特异性抗体结合，然后通过酶标记的二抗和底物反应产生颜色变化，最后通过光度计读取吸光度值来定量测定γ肽(Pγ)的浓度。

人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒通常包含已包被抗体的微孔板、酶标试剂、标准品、洗涤液、显色剂等必需组件。在操作过程中，首先需要将待测样本加入到微孔板中，与人γ肽特异性抗体进行反应。然后，加入酶标试剂，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入显色剂，酶促反应导致颜色变化。最后，通过酶标仪测定吸光度，根据标准曲线计算样本中的人γ肽含量。

人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒

使用人γ肽（Pγ）ELISA试剂盒时，需要注意以下几点：

严格按照人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒说明书进行操作，避免误差。

样本的采集、处理和保存应符合规定，以避免样本的污染和变性。

试剂的保存和使用应遵循规定的温度和条件，以保证试剂的活性和稳定性。

实验过程中应注意安全，避免直接接触有毒或有害的试剂。

人γ肽（Pγ）ELISA试剂盒是一种灵敏度高、特异性强的实验工具，可用于人γ肽的基础研究和临床应用。然而，该试剂盒仅用于研究用途，不得用于医学诊断。在使用前，请仔细阅读说明书，并遵循相关规定和操作流程。

应用^[4][5]

人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒可以用于癌睾抗原CTNNA2的HLA-A2限制性CTL表位鉴定及磷酸化修饰

预测、筛选及鉴定来源于癌/睾丸抗原CTNNA2的HLA-A2限制性的CD8+CTL表位。同时对4位是丝氨酸的表位，尝试磷酸化修饰，即在此位引入磷酸化的丝氨酸，并探讨对表位免疫原性的影响。

方法首先，通过使用免费在线预测工具BIMAS、NetCTL1.2及SYFPEITHI进行预测，得到CTNNA2来源的HLA-A2限制性CTL表位，同时尝试磷酸化的引入。然后，将预测得到的9肽序列，经固相Fmoc法合成，RP-HPLC色谱法纯化，质谱仪分析得到候选肽的分子量。其次，使用T2细胞，通过亲和力测定及复合物稳定性分析，对所有的CTNNA2候选表位进行筛选。RT-PCR分析肿瘤细胞中CTNNA2的表达，筛选得到靶细胞。最后，对3名健康者的外周血单核细胞进行分离及诱导培养，得到特异性的效应细胞。通过人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒、ICS及细胞毒活性等实验来研究CTNNA2表位的免疫原性。

人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒结果1.综合三种预测工具BIMAS、NetCTL1.2和SYFPEITHI，选择11条CTNNA2来源的短肽表位，分别是：P129（ALLSAVTRL）、P138（LILADMADV）、P148（RLLSHLKIV）、P279（ALNEFDNKI）、P345（LLSEYMNNT）、P495（VLTEAVDDI）、P569（KVLEATKLL）、P581（VMPRFAEQV）、P721（IMMEMTDFT）、P779（LMNAVVLTV）和P784（VLTVKASYV），同时在P129和P148的4位处引入磷酸化的Ser。经Fmoc法合成，质谱验证所有肽的分子量。2.源于CTNNA2的P148和P581的实验结果FI>1.5，可说明亲和力高；P129、P138、P345和P721这4条肽的亲和力结果较高（FI>1）；P148和P581与HLA-A*0201的复合物稳定性最好（DC50>6h）；P138、P345和P721这3条肽的稳定性结果DC50>4h，P129则稳定性一般；两条4位pSer的修饰肽与原肽相比，结合力提高了，尤其是P129-4（pSer）/HLA-A*0201的DC50得到明显改善。3.人γ肽(Pγ)Elisa试剂盒和ICS实验检测CTNNA2原肽及磷酸化肽体外诱导特异性CTLs的能力。除P345外，P129、P138、P148、P581和P721这5条肽效果明显。其中P138、P581和P721在这两实验中的结果都非常明显；ICS实验结果显示P129-4（pSer）和P148-4（pSer）肽特异性的CTL能分泌大量的IFN-γ，但在ELISPOT实验中，相比原肽它们的结果较明显。

参考文献

[1]Toxicity of antiretroviral therapy and implications for drug development.Carr Andrew.Nature reviews.Drug discovery.2003

[2]Improved Titanium Dioxide Enrichment of Phosphopeptides from HeLa Cells and High Confident Phosphopeptide Identification by Cross-Validation of MS/MS and MS/MS/MS Spectra.Li-Rong Yu;Zhongyu Zhu;King C.Chan;Haleem J.Issaq;Dimiter S.Dimitrov;Timothy D.Veenstra.Journal of Proteome Research.2007

[3]Identification of natural MHC class II presented phosphopeptides and tumor-derived MHC class I phospholigands.Meyer Verena S;Drews Oliver;Günder Marc;Hennenlotter Jrg;Rammensee Hans-Georg;Stevanovic Stefan.Journal of proteome research.2009

[4]Phosphoproteomics-Based Characterization ofCancer Cell Signaling Networks.Kozuka-Hata H;Goto Y;Oyama M..2013

[5]刘婧.癌睾抗原CTNNA2的HLA-A2限制性CTL表位鉴定及磷酸化修饰[D].郑州大学,2015.