MFC培养基的应用

背景^[1-3]

MFC培养基是一种用于检测水中粪大肠菌群的特定培养基。

MFC培养基，全称为Membrane Filtration Culture medium，是一种发酵型的培养基，主要用于生活饮用水及其水源水中粪大肠菌群的测定。它的工作原理是基于特定的细菌在MFC培养基中能够分解乳糖产生酸性物质，从而引起培养基pH值的变化，使得菌落显现出特定的颜色变化，通常是亮蓝色，以此作为检测的指标。

MFC培养基的配方通常包含胰胨、多胨、酵母膏粉、乳糖、3号胆盐、琼脂、玫红酸和苯胺蓝等成分。这些成分共同作用，使得培养基具有分离和培养革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的能力。质控菌包括大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌等，这些菌株在MFC培养基中的生长情况可以作为培养基性能的指标。

在使用时，MFC培养基通常与滤膜法结合使用，即将待测水样通过滤膜过滤，然后将滤膜放置在MFC培养基上进行培养，以便观察是否有粪大肠菌群的生长。

MFC培养基

MFC培养基是一种特定类型的培养基，其特性和应用主要如下：

特性：MFC培养基是一种基本无机盐和简单有机物组成的培养基，具有低营养成分，适用于菌丝状真菌的生长和繁殖。同时，MFC培养基中添加了微生物特异性酶显色底物，具有高特异性和灵敏度。其反应灵敏度和特异性优于传统培养基，并且简便、快速、技术要求低，结果通常在18~24小时内出现。

应用：MFC培养基常用于研究真菌的生理特性、代谢途径和抗生素产生等方面，也可用于真菌的鉴定和分类。例如，MFC肉汤培养基可以用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查。MFC培养基的显色原理使得观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定，特别适用于监测大批量的样本中微生物的筛选与鉴定。

应用^[4][5]

MFC培养基可以用于枯草芽孢杆菌B25抗真菌活性物质的部分特性分析及分离纯化

对芽孢杆菌B25的生理生化进行了较详细鉴定,对发酵培养基组分和发酵条件进行了优化,分析了抗真菌活性物质的部分理化性质,并对抗真菌活性物质进行了分离纯化和抗菌活性蛋白的鉴定,本研究将为拮抗活性物质的开发应用及菌株的进一步遗传改良打下基础。

所作工作如下：采用API50CHB芽孢杆菌生化鉴定系统对芽孢杆菌B25进行生化鉴定,鉴定结果与以前的一致均为枯草芽孢杆菌。以香蕉枯萎病菌为指示菌,分别在LB和MFC培养基这两种不同培养基中接种枯草芽孢杆菌B25,并对其上清液活性进行活性检测。

结果表明：拮抗菌B25在LB培养基中生长繁殖速度快,但其上清液抑菌活性差,MFC培养基培养基中繁殖速度相比而言较慢,上清液抑菌活性较好；同时发现拮抗菌B25抗真菌活性物质是在对数期后期开始产生的,稳定期活性上升到最大值并一直保持在这个水平。为提高枯草芽孢杆菌B25活性物质的产量,通过单因素实验和正交实验设计,对枯草芽孢杆菌B25进行发酵培养基以及发酵条件的优化。

单因素实验表明：葡萄糖为比较适合的外加碳源,牛肉浸膏以及细菌学蛋白胨都是比较理想的外加氮源,无机盐则选择KH2PO4;经优化后的培养基配方为：葡萄糖1.5%,细菌学蛋白胨1.5%,牛肉浸膏0.5%,KH2PO41%；最适发酵条件为：初始pH7、温度28℃、装液量60mL/250mL。利用乙醇沉淀法、乙酸乙酯萃取、硫酸铵沉淀法对活性物质进行提取,发现乙醇沉淀法和乙酸乙酯萃取法均不能提取到活性抗菌物质,只有硫酸铵沉淀法可以将其提取出来,并确定硫酸铵的饱和度为75%。对抗真菌活性物质的部分理化性质进行分析研究,分别分析了抗菌活性物质对温度、pH和蛋白酶(胰蛋白酶、蛋白酶K)的敏感；对抗真菌活性物质的分子量进行估计,用10kDa的超滤管超滤；用特殊培养基(MFC培养基、蛋白培养基、纤维素培养基、几丁质培养基)检测活性液中活性物质的分解情况。

参考文献

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[3]Dendrocin,a distinctive antifungal protein from bamboo shoots[J].H.X.Wang;;T.B.Ng.Biochemical and Biophysical Research Communications,2003(3)

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[5]林宝英.枯草芽孢杆菌B25抗真菌活性物质的部分特性分析及分离纯化[D].海南大学,2015.