人甲状腺素抗体(TAb)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人甲状腺素抗体(TAb)Elisa试剂盒是一种用于检测人血清中甲状腺素抗体浓度的试剂盒。甲状腺素抗体是人体免疫系统中产生的针对甲状腺激素的抗体，通常在自身免疫性甲状腺疾病中出现，如Graves病和Hashimoto's甲状腺炎。

ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的生物化学检测方法，它利用酶作为标记，通过特定的反应来检测样本中特定物质的浓度。在人甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒中，将含有甲状腺素抗体的样本与包被有甲状腺素的微孔板进行反应，如果样本中含有TAb，则TAb会与包被的甲状腺素结合。然后，再添加与TAb结合的酶标记二抗，使酶与二抗结合。最后，添加底物，酶会催化底物反应产生颜色变化，通过测定颜色的深浅可以确定样本中TAb的浓度。

人甲状腺素抗体(TAb)Elisa试剂盒

人甲状腺素抗体(TAb)Elisa试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

人甲状腺素抗体(TAb)Elisa试剂盒可以用于化学发光免疫分析在游离甲状腺素测定中的应用研究

围绕游离甲状腺素的化学发光免疫分析方法的建立和优化开展了一些研究。通过结合抗体-抗原的高特异免疫分析技术、高效的酶标记技术和化学发光检测体系,建立了测定体液内甲状腺激素的化学发光免疫分析方法,对大批量临床样品筛选、检测和体外诊断试剂的研发有一定临床应用价值和学术意义。首先,简要介绍了化学发光免疫分析的原理和甲状腺激素的种类、来源和作用功能,并对游离甲状腺激素的检测技术和方法进行了综述。其次,建立了一种简单鉴定小分子的酶标记物质量方法,通过实验证明,本方法可以在选用原料时保证酶标记物质量的合格,从而保证了后续实验结果的准确性。再次,建立了一种基于磁性微粒子化学发光免疫分析定量测定人血清中的游离甲状腺素的方法,该方法具有灵敏度高、高特异、快速、稳定性高、重复性好等特点。

本方法使用人甲状腺素抗体(TAb)Elisa试剂盒辣根过氧化物酶标记的甲状腺素类似物与血清中的游离甲状腺素共同竞争结合羊抗甲状腺素抗体；表面包被有抗异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)的磁性微粒子用作免疫反应的固相载体和分离剂,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)催化H2O2-luminol化学发光体系作为检测体系；对免疫反应的试验条件及各项物理化学参数如：反应温度、温育时间、稀释度、磁性微粒子和发光底物的用量等进行了测定和优化。在最佳条件下,该方法的线性范围是0-122 pmol L-1,检测限为0.25 pmol L-1;批内变异和批间变异均小于14.6%；通过本法对实际血清样本检测,并将结果与商品化试剂盒的测定结果进行相关分析,其相关系数r2=0.9592,证实本法可用于人血清中游离甲状腺素的临床测定。

最后,使用通用人甲状腺素抗体(TAb)Elisa试剂盒二抗固相法制备固相抗甲状腺素抗体,使用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶化学发光体系作为检测体系,发展了一种通用二抗固相化学发光酶免疫分析方法并将其应用于临床游离甲状腺素的测定。驴抗羊IgG(即二抗)通过物理吸附包被在96孔聚苯乙烯微孔板上,对其进行封闭后,作为一个通用的固相应用于各种物质的免疫分析。向该固相中加入甲状腺素的多克隆羊源抗体,样品抗原和酶标记物后进行温育反应,羊抗甲状腺素抗体通过与二抗之间的免疫反应被间接固定化在聚苯乙烯微孔板上,样品抗原和酶标记物竞争结合羊抗甲状腺素抗体,形成免疫复合物,通过测定酶促化学发光体系的发光强度来达到定量检测的目的。对一些相关参数和实验条件诸如免疫试剂的稀释度、温育时间、化学发光反应时间以及底物液加样体积进行了考查和优化,并对建立的方法进行了评价。

参考文献

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[5]靳辉.化学发光免疫分析在游离甲状腺素测定中的应用研究[D].河北大学,2012.