大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa试剂盒是一种用于检测和量化大鼠体内GM-CSF水平的实验室诊断工具。

GM-CSF，全称为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，也被称为集落刺激因子2（CSF2），它是一种单体糖蛋白，由多种细胞产生，主要作用是刺激造血干细胞和不同发育分化阶段的造血祖细胞增殖分化，从而在半固体培养基中形成相应细胞集落。

ELISA试剂盒通常包含有针对特定抗原（在本例中是GM-CSF）的抗体，这些抗体被固定在微孔板上。当添加含有GM-CSF的样本时，抗原会与固定在板上的抗体结合。然后，通过一系列的洗涤和添加其他抗体及底物步骤，最终可以通过颜色变化来定量测定样本中的GM-CSF浓度。

这种试剂盒在生物医学研究和临床诊断中非常有用，尤其是在研究炎症反应、免疫调节以及某些疾病的生物标志物时。例如，GM-CSF在自身免疫疾病、感染性疾病和某些癌症中的表达水平可能会发生变化，因此测量这一因子可以帮助研究人员了解疾病的进程和治疗效果。

大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa试剂盒

大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa试剂盒操作步骤：

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa试剂盒可以用于不同低温刺激下大气PM2.5对大鼠呼吸系统的影响及机制研究

通过观察不同低温刺激下大气细颗粒物(PM2.5)所致炎性作用和氧化应激等指标来探讨二者对呼吸系统影响的交互作用及作用机制。

方法1.体内实验:将48只健康雄性Wistar大鼠按体重随机分成6组,每组8只,分别给予0℃、10℃及20℃(常温对照)的单纯低温刺激及低温+PM2.5暴露。低温+PM2.5暴露组给予低温刺激及气管滴注PM2.5悬液(每次8mg/0.25ml),单纯低温刺激组给予无菌生理盐水(每次0.25ml/只),间隔48 h,连续3次。末次染毒48 h后处死大鼠。

2. 体外实验:肺泡巨噬细胞(AMs)原代培养技术分离和培养AMs,分成18℃(强低温)、24℃(中低温)、30℃(弱低温)、37℃(常温)四个温度组,每个温度组又分为高剂量(100μg/ml)组、中剂量(50μg/ml)组、低剂量(25μg/ml)组、空白对照组(0μg/ml)四个处理组培养。观察倒置显微镜下AMs变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定相对存活率,中性红法测定吞噬功能。

3. 指标测定:细胞计数板计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞数目,采用大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa试剂盒酶联免疫法(ELISA)测定分析肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、C反应蛋白(CRP)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)以及中性粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平,试剂盒法测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)。

大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa试剂盒结果1.体内实验结果:各PM2.5暴露组BALF中观察到显著增高的总细胞和中性粒细胞(P<0.05),且各炎性因子水平均显著高于相应单纯低温刺激组(P<0.05)。各PM2.5暴露组中SOD、GSH-Px及MDA水平与相应单纯低温刺激组相比呈现明显不同(P<0.05)。肺组织IL-6及CRP水平、血浆中IL-6、IL-8及CRP水平在各PM2.5染毒组中均显著高于单纯低温刺激组(P<0.05)。肺组织IL-6、CRP水平与血浆IL-6、CRP水平存在显著相关性(P<0.05)。BALF中性粒计数、IL-6、IL-8及肺组织IL-6、SOD交互作用检验均发现显著的交互作用(P<0.05)。

参考文献

[1]ROS production and gene expression in alveolar macrophages exposed to PM 2.5 from Baghdad,Iraq:Seasonal trends and impact of chemical composition[J].Samera H.Hamad;;James J.Schauer;;Dagmara S.Antkiewicz;;Martin M.Shafer;;Ahmed KH.Kadhim.Science of the Total Environment,2016

[2]Particle pollution in Rio de Janeiro,Brazil:Increase and decrease of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8 in human lung cells[J].Rosa I.Rodríguez-Cotto;;Mario G.Ortiz-Martínez;;Evasomary Rivera-Ramírez;;Vinicius L.Mateus;;Beatriz S.Amaral;;Braulio D.Jiménez-Vélez;;Adriana Gioda.Environmental Pollution,2014

[3]Temperature-related mortality in 17 large Chinese cities:How heat and cold affect mortality in China[J].Wenjuan Ma;;Renjie Chen;;Haidong Kan.Environmental Research,2014

[4]Exposure to particular matter increases susceptibility to respiratory Staphylococcus aureus infection in rats via reducing pulmonary natural killer cells[J].Hui Zhao;;Wenxing Li;;Yanfeng Gao;;Jianqiang Li;;Haibin Wang.Toxicology,2014

[5]晚亚雄.不同低温刺激下大气PM2.5对大鼠呼吸系统的影响及机制研究[D].兰州大学,2016.