WISH人羊膜细胞的应用

背景^[1-3]

WISH人羊膜细胞指的是从人羊膜组织中提取和培养的细胞。羊膜是胎盘的最内层组织，位于胎儿绒毛膜的表面，与发育中的胎儿联系紧密，同时也是母体与胎儿之间进行物质交换的重要组织。羊膜细胞，特别是羊膜上皮细胞，具有多种独特的生物学特性，如多能干性、无限增殖性、抗炎特性，且没有致瘤性和免疫原性。

WISH人羊膜细胞在再生医学和细胞治疗领域具有广泛的应用前景。例如，它们可以用于修复受损的组织或器官，或者在疾病治疗中发挥关键作用。由于人羊膜细胞具有无免疫排斥反应的特性，治疗时无需配型，这使得它们成为一种理想的种子细胞。

然而，WISH人羊膜细胞的分离、培养和应用也面临一些挑战。例如，在实验室中，悬浮细胞的转染（包括人羊膜细胞）通常比贴壁细胞更为困难，因为悬浮细胞不易培养且易死亡。为了提高转染效率，研究人员可能会尝试使用非脂质体的转染试剂或电转染方法。

此外，为了充分发挥人羊膜细胞的治疗潜力，还需要深入研究其生物学特性、分化能力以及与宿主组织的相互作用。总的来说，WISH人羊膜细胞是一个充满潜力的研究领域，有望在未来的医学应用中发挥重要作用。

WISH人羊膜细胞

WISH人羊膜细胞培养操作

1)复苏WISH人羊膜细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)WISH人羊膜细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)WISH人羊膜细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

WISH人羊膜细胞可以用于苯丙氨酸衍生物对7种细胞系的生物学作用研究

L-4-氟苯丙氨酸（Fp）是人体中一些羟化酶的抑制剂，具有抗肿瘤作用。L-4-氯苯丙氨酸（Clp）是促黄体激素释放激素的拮抗物。L-4-磷酸基-苯丙氨酸（Pp）是许多酪氨酸磷酸酶的底物，能使癌细胞生长停止在细胞周期的S期。然而，苯丙氨酸还有许多其他衍生物，如L-4-溴（Bp）、碘（Ip）、氨基（Ap）、硝基（Np）、磺酸基（Sp）、甲氧基（Mp）、氰基（Cp）-苯丙氨酸等，它们的生物学作用如何，值得深入研究。为此，我们用MTT方法检测了上述10种苯丙氨酸衍生物对小鼠黑色素瘤细胞系B16、人非小细胞肺癌系A549、中国仓鼠卵巢细胞系CHO、人宫颈癌细胞系Hela、WISH人羊膜细胞、人乳腺癌细胞系MCF-7、人结肠癌细胞系HT-29的细胞活性影响。此外，用Hoechst染色方法检测这10种苯丙氨酸衍生物对上述7种细胞系凋亡的诱导作用，以及用甲基纤维素集落形成的方法检测10种苯丙氨酸衍生物对上述7种细胞集落形成的影响。

结果发现，10种苯丙氨酸衍生物对7种细胞（对小鼠黑色素瘤细胞系B16、人非小细胞肺癌系A549、中国仓鼠卵巢细胞系CHO、人宫颈癌细胞系Hela、WISH人羊膜细胞、人乳腺癌细胞系MCF-7、人结肠癌细胞系HT-29）的活性影响、诱导细胞凋亡和抑制细胞成集落三方面有差异。Fp、Ip、Mp这三种衍生物对上述7种细胞系活性有影响，并且Hoechst染色结果表明它们能够诱导上述7种细胞系（对小鼠黑色素瘤细胞系B16、人非小细胞肺癌系A549、中国仓鼠卵巢细胞系CHO、人宫颈癌细胞系Hela、WISH人羊膜细胞、人乳腺癌细胞系MCF-7、人结肠癌细胞系HT-29）凋亡，因此说明Fp、Mp、Ip通过诱导细胞凋亡影响细胞活性。Bp、Sp、Pp有抑制上述7种细胞系集落形成的作用，说明它们通过抑制细胞生长影响细胞的活性。Ap、Np对细胞的毒性较弱，细胞集落形成实验结果显示，它们有抑制细胞集落形成的作用，因此它是通过抑制细胞生长影响细胞活性。它们对7种细胞的活性大小有差异，Ap对CHO细胞系的活性没有影响，Np对HT-29、WISH人羊膜细胞、A549这三种细胞系的活性有影响。Hoechst染色结果表明它们没有诱导细胞凋亡的作用。Clp除了对MCF-7和HT-29两种细胞系的活性有影响外，对其它细胞没有影响。细胞集落形成实验结果显示，其对这两种细胞集落形成的抑制作用大于对其它细胞，因此，它通过抑制MCF-7和HT-29两种细胞系的生长从而影响细胞活性。Cp对7种细胞系活性没有影响，并且Hoechst染色和细胞成集落实验显示对7种细胞没有明显作用。

参考文献

[1]“Where,O Death,Is Thy Sting?”A Brief Review of Apoptosis Biology[J].Andrew H.Wyllie.Molecular Neurobiology,2010(1)

[2]The PTEN-AKT3 signaling cascade as a therapeutic target in melanoma.[J].Madhunapantula Subbarao V;;Robertson Gavin P.Pigment cell&melanoma research,2009

[3]Members of the EGF receptor family in normal and pathological epidermis.[J].Poumay Yves;;Mitev Vanio.Folia medica,2009

[4]Aquaporins and cell migration.[J].Papadopoulos M C;;Saadoun S;;Verkman A S.Pflugers Archiv:European journal of physiology,2008

[5]陈冉.苯丙氨酸衍生物对7种细胞系的生物学作用研究[D].河南师范大学,2012.