LS1034 人结直肠癌细胞系的应用

背景^[1-3]

LS1034人结直肠癌细胞系是一种来源于人类结直肠癌的细胞系，具有多种生物学特性和功能。以下是一些关于LS1034细胞系的信息：

来源：LS1034细胞系最初由Dr.J.A.Hartwell于1981年从一名患有结直肠癌的男性患者的肿瘤组织中分离出来。

培养条件：LS1034细胞系通常在DMEM(高糖)培养基中培养，添加10%胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。细胞生长在37°C、5%CO2的恒温培养箱中。

生物学特性：LS1034细胞系具有较高的增殖能力和较强的侵袭性，可用于研究结直肠癌的发生、发展和转移机制。此外，LS1034细胞系还被广泛用于药物筛选和毒性评估实验中。

基因表达：LS1034细胞系具有一些与结直肠癌相关的基因表达特征，如KRAS、NRAS、BRAF、TP53、SMAD4等。这些基因突变在结直肠癌的发生和发展中起着重要作用。

应用：LS1034细胞系已经被广泛应用于结直肠癌的基础研究、药物研发和临床前研究中。例如，它可以用于研究肿瘤生长、转移和耐药性等生物学特性；也可以用于筛选新的抗癌药物和评估其疗效和安全性。

LS1034人结直肠癌细胞系

LS1034人结直肠癌细胞系培养操作

1)复苏LS1034人结直肠癌细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)LS1034人结直肠癌细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)LS1034人结直肠癌细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4-5]

LS1034人结直肠癌细胞系可以用于PGC-1a促进人结直肠癌细胞生长、迁移、侵袭及人脐静脉内皮细胞迁移、侵袭和血管生成

研究探讨PGC-1α在人结直肠癌细胞生长、迁移、侵袭及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移、侵袭和血管生成中的作用,为结直肠癌转移和血管生成治疗提供新的靶点和理论依据。

方法1.免疫组织化学染色:利用组织芯片检测人结肠腺癌和癌旁组织中PGC-1α的蛋白表达差异,并分析其表达水平与临床病例资料的关系。

2. 蛋白质免疫印迹:检测LS1034人结直肠癌细胞系与正常结肠上皮细胞系中PGC-1α的蛋白表达水平;检测临床结直肠癌和癌旁组织中PGC-1α的蛋白表达水平。

3. 构建稳转PGC-1α的LS1034人结直肠癌细胞系:购买3个包含不同PGC-1αshRNA序列的PLKO.1载体质粒和1个PGC-1α过表达的PHBLV载体质粒。随机选取两个PGC-1α表达量中等的结直肠癌细胞系DLD-1和LoVo,利用慢病毒转染技术,同时构建稳定敲低和过表达PGC-1α的结直肠癌细胞株。利用蛋白质免疫印迹检测稳转细胞株中PGC-1α的敲低以及过表达效果,判断稳转细胞株是否建立成功。

4. 细胞增殖实验:检测PGC-1α敲低和过表达对LS1034人结直肠癌细胞系增殖能力的影响。

5. 平板克隆实验:检测PGC-1α敲低和过表达对LS1034人结直肠癌细胞系克隆形成能力的影响。

6. Transwell迁移侵袭实验:检测PGC-1α敲低和过表达对LS1034人结直肠癌细胞系迁移和侵袭能力的影响。检测PGC-1α敲低和过表达的人结直肠癌细胞条件培养基对HUVECs迁移和侵袭能力的影响。

7. 细胞免疫荧光:与蛋白质免疫印迹一起检测PGC-1α敲低和过表达对LS1034人结直肠癌细胞系增殖、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物表达的影响。

8. 细胞划痕实验:检测敲低和过表达PGC-1α的LS1034人结直肠癌细胞系条件培养基对HUVECs迁移能力的影响。

9. 小管形成实验:检测敲低和过表达PGC-1α的LS1034人结直肠癌细胞系条件培养基对HUVECs管腔形成数量的影响。

10.裸鼠皮下成瘤模型:选用DLD-1对照组(PLKO.1)和敲低PGC-1α的DLD-1(sh1)稳转细胞株进行裸鼠皮下成瘤实验,观察敲低PGC-1α对结直肠癌体积、重量、增殖、侵袭、EMT及血管生成的影响。

结果1.组织芯片结果显示PGC-1α在人结肠腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001),且结肠腺癌组织中PGC-1α的表达水平与淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。2.PGC-1α在7株LS1034人结直肠癌细胞系中的表达水平均高于正常结肠上皮细胞。20对临床结直肠癌样本中,有13对结直肠癌样本中PGC-1α的表达水平明显高于癌旁组织;10对具有淋巴结转移的结直肠癌样本中有6对样本PGC-1α的表达水平高于癌旁组织。3.蛋白质免疫印迹结果显示敲低和过表达PGC-1α的结直肠癌稳转细胞株构建成功

参考文献

[1]Structure and Dynamics of the Liver Receptor Homolog 1-PGClalpha Complex.Mays S G;Okafor C D;Tuntland M L,et al.Mol Pharmacol.2017

[2]Expression of fatty acid synthase is regulated by PGC1 alpha and contributes to increased cell proliferation.Yun S H;Shin S W;Park J I.Oncol Rep.2017

[3]The hitchhiker''s guide to PGC-1 alpha isoform structure and biological functions.Martinez-Redondo V;Pettersson AT;Ruas JL.Diabetologia.2015

[4]Metabolic regulation of cell growth and proliferation.Zhu J;Thompson CB.Nat Rev Mol Cell Biol.2019

[5]张秋爽.PGC-1a促进人结直肠癌细胞生长、迁移、侵袭及人脐静脉内皮细胞迁移、侵袭和血管生成[D].郑州大学,2021.