5min极速RNA提取试剂盒的操作流程

概述^[1]

RNA提取试剂盒，用于各种植物、动物、微生物的RNA提取，在每个试剂盒里都有一份使用说明书。实验者只需要按照说明书上的步骤操作即可。使用时无需配制其它试剂，非常方便，适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于分子生物学后实验。5min极速RNA提取试剂盒采用独特的裂解液，可快速可靠从组织、细胞、抗凝全血、病毒液样本中纯化出高纯度的总RNA。该RNA提取试剂盒是目前国际上操作步骤最少、用时最短的RNA提取试剂盒。应用本试剂盒提取的RNA可直接用于反转录、基因克隆、定量检测、文库构建、杂交等多种分子生物学实验。

产品组成

优势^[1]

用时最短：极强的裂解能力使得样品瞬间裂解，组织细胞样品可在5min内完成总RNA的提取。

超高纯度：该试剂盒采用柱式纯化，获取的RNAA260/A280为2.0~2.2，A260/A230为1.9~2.1。

高质量RNA：使用该试剂盒获取的RNA完整性良好。

使用安全：无需酚/氯仿抽提，减少了有毒有害物质。

操作极简化：只需将样品与裂解液A和B混合，经一步挂柱和洗脱即可获得高质量总RNA。

提取流程^[1]

样本量及RNA产量

储存^[1]

室温保存，可保存2年。

实例^[1]

Fig.应用新海基因5min极速RNA提取试剂盒分别提取的Hela细胞（a)、人心肌组织（b）和新鲜杨树叶的总RNA(c)。

操作流程^[1]

1.关于平衡液的使用

核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会老化而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。

使用方法：吸取100μl的平衡液至柱子中。13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

2．样本预处理

●培养细胞：如果是贴壁细胞，直接弃去上清（6孔板单孔），用滤纸吸走多余液体，而悬浮培养细胞或经消化脱落的贴壁细胞离心（500g离心5分钟）收集，去上清，留下细胞团块，控制细胞数<1×10⁶。

●组织块：新分离的组织或RNAwait中冻存的组织，放入组织研磨器（筛网）中，根据组织重量加入生理盐水（<50mg组织/ml，例如50mg组织加入生理盐水1ml以上），用研磨棒将组织轻轻研磨过钢网，立即收集过网滤液按500g离心5分钟收集细胞，去上清，留下细胞团块。

●细菌：取培养良好的细菌菌液100ul直接放入1.5mleppendorf管中后进行提取。较稀的菌液取0.5-1ml离心后留下细菌团块及大约100ul上清，充分振荡悬浮细菌，直至没有细胞团块（重要）。

●病毒：取血清或血浆等样本液100ul，放入1.5mleppendorf管中后进行提取。样本中有较多红细胞时需先低速离心去除红细胞。

●植物组织：鲜嫩植物组织（50mg）在液氮中研磨粉碎，待液氮蒸发后加入1ml生理盐水混匀，取100ul入1.5mleppendorf管中。

●抗凝全血及骨髓：先用淋巴细胞分离液分离获得的白细胞后，按照上述培养细胞的方法操作。

●血浆、腹胸水、脑脊液、羊水等：样本液混匀后直接吸取100ul放入1.5mleppendorf管中后进行提取，样本中应无红细胞或仅有少量红细胞，否则需先低速离心去除红细胞。或取腹胸水、脑脊液、羊水等大量液体样本离心，留下底部细胞及100ul上清，充分吹打混匀后吸取100ul放入1.5mleppendorf管中后。

3.RNA提取

1)在处理好的样品中，加入裂解液RA2液500μl，充分吹打混匀5-10次，静置1min。

2)将样品裂解物全部吸入或倒入内套管中（已插在外套管），13500g离心1min。

3)取出内套管，弃去外套管中液体后放回内套管，加入500μl漂洗液RW，13500g离心1min。

4)重复步骤3再洗一次。

5)取出内套管。

主要参考文献

[1]CN201720132381.8一种RNA提取试剂盒