人胃动素(MTL)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人胃动素(MTL)ELISA KIT用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中人胃动素(MTL)的浓度。

检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人胃动素(MTL)抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的人胃动素(MTL)会与包被抗体结合，游离的成分被洗去，然后依次加入生物素化的抗人胃动素(MTL)抗体，HRP-链霉亲和素结合物,最后加入单组份TMB底物液。TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，人胃动素(MTL)浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人胃动素(MTL)的浓度。

人胃动素(MTL)ELISA KIT

标本要求

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

操作流程

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于消化间期胃肠移行性复合运动的调节及其临床意义研究

消化间期胃肠运动主要表现为移行性复合运动（Migrating motor complex，MMC），其启动和移行的调节机制尚不清楚。体表胃电（Electrogastrogram，EGG）属非创伤性检查，近年来计算机技术应用于胃电研究大大加速了胃电图的发展，但EGG能否反映MMC和胃排空的状态仍不明了。

研究在狗试验中观察了多种因素，特别是肠神经系统（Enteric nervous system，ENS）中的脑肠肽对MMC的影响，并在临床上观察了人MMC的调节和EGG与MMC和胃排空的关系。

应用慢性植入消化道腔外应力传感器记录清醒狗消化间期MMC。采用静脉注射和十二指肠、空肠肠段的肠系膜动脉插管直接注射药物技术，观察MMC的变化和MMC不同时相血浆5-羟色胺（5-HT）和胃动素的水平。对健康人、功能性消化不良（FD）病人和糖尿病胃轻瘫病人同时进行EGG和胃内压力、EGG和胃固体排空的检查，并在健康人和FD病人MMC不同时相抽取静脉血观察血浆胃动素对MMC启动的作用。

结果表明：（1）MMC不同时相血浆5-HT和胃动素浓度呈周期性变化，并显示5-HT峰值在胃动素峰值之前出现。5-HT4受体拮抗剂可以阻断胃动素的升高。提示5-HT激发了胃动素的释放。

（2） 在MMCⅠ相时静脉或十二指肠动脉插管注射一氧化氮合酶抑制剂（NOS）L-NAME，引起胃和十二指肠持续强烈收缩；而静脉给予NO合成前体物L-精氨酸后胃和十二指肠MMCⅠ相时间延长，MMC的Ⅱ相和Ⅲ相动力指数明显降低。在灌流L-精氨酸背景上，注射胃动素引起的胃和十二指肠收缩平均振幅低于对照组。

（3） 在MMCⅠ相时静脉注射胃动素和空肠肠段动脉局部注射5-HT和胃动素分别引起MMCⅢ相收缩；静脉注射胃动素引起体表胃电振幅明显升高。

（4） 空肠肠段动脉局部灌流5-HT4受体拮抗剂、抗胃动素血清、5，6-双羟色胺和河豚毒素（TTX）均可阻断MMCⅢ相在灌流肠段出现和向远端传播。

（5）在MMCⅠ相时口服Cisapride引起胃、十二指肠持续收缩，中断了MMC的周期，体内胃肠浆膜肌电显示负载慢波上的锋电位显著增加，同时明显升高血浆胃动素浓度。给予抗胃动素血清和5-HT4受体拮抗剂则明显减弱Cisapride对胃肠的收缩作用；阿托品则完全阻断Cisapride的收缩作用；5-HT4受体拮抗剂和阿托品也分别阻断Cisapride所致的血浆胃动素升高。

参考文献

[1]Abnormal gastric myoelectrical activity and delayed gastric emptying in patients with symptoms suggestive of gastroparesis[J].J.D.Z.Chen,Zhiyue Lin,Jie Pan,Richard W.McCallum.Digestive Diseases and Sciences.1996(8)

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[3]Nitric oxide synthase and VIP distribution in enteric nervous system in idiopathic chronic constipation[J].Camillo Cortesini,Fabio Cianchi,Aldo Infantino,Mario Lise.Digestive Diseases and Sciences.1995(11)

[4]Gastric emptying and myoelectrical activity in children with nonulcer dyspepsia[J].Giuseppe Riezzo,Salvatore Cucchiara,Marisa Chiloiro,Raffaele Minella,Vito Guerra,Italo Giorgio.Digestive Diseases and Sciences.1995(7)

[5]杨春敏.消化间期胃肠移行性复合运动的调节及其临床意义[D].中国协和医科大学,1998.