大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA KIT用于测定血清、血浆及相关液体样本中大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)的活性及含量。

大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA KIT检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被样本抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA KIT

样品收集、处理及保存方法：

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

操作步骤

1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9)在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于胃癌的血脂水平及相关调控基因表达谱分析和意义研究

能量代谢异常是肿瘤的重要特征之一。研究拟通过检测胃癌患者血清血脂水平,分析脂质代谢在胃癌中的意义,并初步探讨胃癌血脂异常的分子机制。

方法：采用日立全自动生化分析仪检测192例健康对照,242例胃炎患者及137例原发性胃癌患者血清血脂水平,并统计分析其与胃癌分期,转移等病理参数的相关性。利用生物信息学技术工具分析肿瘤基因组图谱（TCGA）和基因表达数据库（GEO）中胃癌数据,鉴定筛选胃癌调控血脂代谢的关键差异基因。利用KM-Plotter对血脂调控关键基因对胃癌患者生存期的影响进行评估。并分析胃癌肿血脂调控基因的表达与血清血脂水平的相关性。

结果1.与健康对照相比,胃癌患者血清TC、HDL、APOA1、APOB显著下降,而Lp（a）显著升高。并且这些指标与胃癌的临床进展分期以及转移呈显著的相关性;

2. 通过与TCGA和GEO数据库比对,从血脂代谢的6983个相关基因中筛选出了HMGCR、NPC1L1等37个与胃癌血脂调控相关的关键基因。

3. 表达差异分析发现,24个血脂调控基因在胃癌中的表达水平与对照相比有显著差异（P＜0.05）,其中CETP、SR-B1等9个基因表达上调,而APOB、LDLR、PPARA等15个基因表达下调。生存期结果显示,HMGCR、NPC1L1等基因高表达组比低表达组具有更长的总生存时间,而CETP、LDLR等23个基因的高表达则会显著降低胃癌患者的总生存时间。

结论本研究证实胃癌患者存在血脂异常,生物信息学分析证实37个参与胃癌血脂调控的基因。胃癌中血脂调控基因的异常表达调控血清血脂浓度到水平在胃癌的发生发展中发挥重要作用。

参考文献

[1]Cancer statistics in China,2015.[J].Chen Wanqing,Zheng Rongshou,Baade Peter D,Zhang Siwei,Zeng Hongmei,Bray Freddie,Jemal Ahmedin,Yu Xue Qin,He Jie.CA:a cancer journal for clinicians.2016(2)

[2]Cancer statistics,2016.[J].Siegel Rebecca L,Miller Kimberly D,Jemal Ahmedin.CA:a cancer journal for clinicians.2016(1)

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[4]MTTP-297H polymorphism reduced serum cholesterol but increased risk of non-alcoholic fatty liver disease-a cross-sectional study.[J].Hsiao Pi-Jung,Lee Mei-Yueh,Wang Yeng-Tseng,Jiang He-Jiun,Lin Pi-Chen,Yang Yi-Hsin Connie,Kuo Kung-Kai.BMC medical genetics.2015(1)

[5]张鹏.胃癌的血脂水平及相关调控基因表达谱分析和意义[D].上海交通大学,2017.