人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA KIT用于测定血清、血浆及相关液体样本中人酰化刺激蛋白(ASP)的活性及含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒水平。用纯化的人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒,再与HRP标记的酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的酰化刺激蛋(ASP)ELISA试剂盒呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒浓度。

人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA KIT

标本收集：

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过*后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。

3.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

操作步骤：

（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 

（2）酶标板置4℃，包被过夜。

（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 

（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

（6）洗板，同（4）。 

（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。 

（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

（9）洗板，同（4）。 

（10）每孔加TMB显色液100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 

（12）分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

应用^[4][5]

用于多囊卵巢综合征患者血浆酰化刺激蛋白、脂联素与胰岛素抵抗的相关性研究

以多囊卵巢综合征（Polycystic Ovary Syndrome,PCOS）患者为研究对象,检测其血浆酰化刺激蛋白（Acylation-stimulating protein,ASP）和血浆脂联素（Adiponectin,APN）水平,建立HOMA稳态模型评价胰岛素抵抗程度,探讨PCOS患者酰化刺激蛋白（ASP）、血浆脂联素（APN）与胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）之间的关系。

方法：根据体重指数（body mass index,BMI）将PGOS患者及健康受试者进行分组。BMI≥25kg/㎡为肥胖,BMI＜25kg/㎡为非肥胖。分别将30例PCOS患者与35例健康志愿者分为以下4组:PCOS肥胖组（OP组）16例,PCOS非肥胖组（NP组）14例。单纯肥胖组（Ob）组17例,正常对照组（NC组）18例。采用酶联免疫法（ELISA）测定各组血浆ASP及血浆APN水平,电化学发光法和葡萄糖氧化酶法,分别测定各组空腹胰岛素、空腹血糖值。各组胰岛素抵抗采用稳态模型估计法,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,评价胰岛素抵抗程度。结果（1）PCOS患者血浆ASP水平明显高于健康对照组（P＜0.05）,且Ob组ASP与NC组比较也升高（P＜0.05）。

（2）PCOS患者OP组APN水平低于NP组,Ob组APN水平与NC组比较也有所降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。（3）相关分析显示PCOS患者,无论是否肥胖,血浆ASP水平与血浆APN水平呈负相关,与BMI、HOMA-IR呈正相关。

结论PCOS患者血浆ASP水平均较健康人群组高,差异具有统计学意义。肥胖PCOS患者血浆ASP水平更高。肥胖PCOS患者血浆APN水平与非肥胖PCOS患者比较有所降低,差异具有统计学意义。PCOS患者血浆ASP与血浆APN呈显著负相关,与BMI、HOMA-IR正相关。

参考文献

[1]Resistin Stimulation of 17α-Hydroxylase Activity in Ovarian Theca Cells in Vitro:Relevance to Polycystic Ovary Syndrome[J].Iqbal Munir,Hui-Wen Yen,Talia Baruth,Rafal Tarkowski,Ricardo Azziz,Denis A.Magoffin,Artur J.Jakimiuk.The Journal of Clinical Endocrinology＆Metabolism.2005(8)

[2]Acylation-stimulating protein precursor proteins in adipose tissue in human obesity[J].Zhunan Xia,Katherine Cianflone.Metabolism.2003(10)

[3]A Modern Medical Quandary:Polycystic Ovary Syndrome,Insulin Resistance,and Oral Contraceptive Pills[J].Evanthia Diamanti-Kandarakis,Jean-Patrice Baillargeon,Maria J.Iuorno,Daniela J.Jakubowicz,John E.Nestler.The Journal of Clinical Endocrinology＆Metabolism.2003(5)

[4]Plasma Acylation-Stimulating Protein,Adiponectin,Leptin,and Ghrelin before and after Weight Loss Induced by Gastric Bypass Surgery in Morbidly Obese Subjects[J].May Faraj,Peter J.Havel,Steve Phélis,David Blank,Allan D.Sniderman,Katherine Cianflone.The Journal of Clinical Endocrinology＆Metabolism.2003(4)

[5]邓秀娟.多囊卵巢综合征患者血浆酰化刺激蛋白、脂联素与胰岛素抵抗的相关性研究[D].华中科技大学,2008.