凝血酶的作用与制备

凝血酶（英语：Thrombin，EC 3.4.21.5）是一种“胰蛋白酶样”丝氨酸蛋白酶蛋白质，在人体中被F2基因所编码。在凝血作用级级联反应中，凝血酶原（凝血因子Ⅱ）被蛋白水解性切除以生成凝血酶，级联反应最终阻止了血液的继续流失。凝血酶转而作为一种丝氨酸蛋白酶以使可溶性的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白，同时催化其他许多与凝血相关的反应。

作用

凝血酶是一种广泛存在于人体和动物血液中的丝氨酸蛋白酶，它是血液凝血级联 反应中的主要效应蛋白酶，显现出促凝和抗凝的特性。当循环凝血因子在暴露的血管外组 织与组织因子相接触时，凝血酶会在组织上聚集。凝血酶通过激活血小板催化纤维蛋白原 转化为纤维蛋白，促进血块稳定，从而在血栓性疾病的引发和发展中发挥核心作用。由于凝 血酶能直接作用于血液中的纤维蛋白原，促使其转变为纤维蛋白、加速血液的凝固而止血， 因此临床上将其用于外伤、手术、口腔、耳鼻咽喉、泌尿、妇产科、消化道出血的止血，特别是 用于手术中不易结扎的小血管止血、消化道出血及外伤出血等。

制备方法

目前，临床上应用的凝血酶主要是由人血以及猪、牛等动物血分离提取的。其中， 由于猪血来源充分，原料成本低等因素，所以大量凝血酶产品都是由猪血制备的，少量的是 由人血及牛血等血液制备的。但是，不论是从动物血还是从人血制备的凝血酶产品，现有的 制备方法都会存在以下几个问题：（1)凝血酶产品效价不稳定；（2)产品杂质及杂蛋白浓度 偏高；(3)存在引入各种病毒的风险，这些都会限制凝血酶产品的临床应用，并造成安全隐患。

一种凝血酶的制备方法，该制备方法包括以下步骤：  

(1) 过滤除去猪血浆中的杂质；  

(2) 向步骤（1)得到的过滤的猪血浆加入病毒灭活试剂，进行病毒灭活处理；

(3) 向步骤（2)得到的经病毒灭活处理的猪血浆加入吸附剂，吸附凝血酶原，抽滤；  

(4) 以包含11. 7克/升氯化钠、3克/升柠檬酸三钠的水溶液洗涤步骤（3)得到的吸附凝血酶原的吸附剂；  

(5) 将步骤（4)得到的吸附凝血酶原的吸附剂浸泡于包含117克/升氯化钠、3克/升柠檬酸三钠的水溶液中，抽滤；  

(6) 将步骤（5)得到的滤液置于2. 94克/升柠檬酸三钠水溶液中，进行透析；  

(7) 将步骤（6)得到的经透析的溶液加热至33-36°C，加入体积比为7%的溶液A，再加入体积比为7 %的溶液B和体积比为7 %的溶液C，搅拌后静置；其中，所述溶液A为以35 克/升的浓度将氯化钙溶于9克/升的NaCl水溶液并经加热搅拌后离心得到的上清液；溶液B为向步骤（6)得到的经透析的溶液加入体积比为7 %的溶液A并搅拌后，加入体积比为 7%的1摩尔/升的氯化钙水溶液制得的溶液；溶液C为1摩尔/升的氯化钙水溶液；  

(8) 将步骤（7)得到的溶液的pH调节至5. 2-5. 6,静置后离心，将上清液的pH调节至  6. 0-6. 5，静置；  

(9) 将步骤（8)得到的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液；   

(10) 将步骤（9)得到的洗脱液经超滤膜过滤；  

(11) 将步骤（10)得到的滤液经滤膜过滤除菌，再经孔径为20nm的过滤器过滤除去病毒；  

(12) 将步骤（11)得到溶液制成制剂。